摘要
背景和目的： 慢性牙周炎是人类第六大常见疾病，不仅破坏牙周支持组织，而且与多种系统性疾病的发展密切相关。牙龈叶啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.g)作为慢性牙周炎的“优势菌”，已被证实与动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的进展密切相关。然而，P.g在促进AS进展中的具体作用机制仍未完全明确。巨噬细胞胞葬功能在维护AS斑块稳定中发挥关键作用。基于以上研究背景，本课题通过动物实验及细胞实验证明P.g通过抑制巨噬细胞胞葬功能促进AS的进展，同时探讨可能的分子机制。 方法： 1、采用丝线结扎结合局部涂布P.g菌液的方法建立慢性牙周炎小鼠模型，记录小鼠体重变化，利用Micro CT三维重建评价各组小鼠牙周炎情况，油红O染色和苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin，HE)染色评价小鼠AS斑块情况。 2、通过荧光原位杂交和16srDNA扩增检测小鼠主动脉组织中P.g特异性基因片段，并通过ELISA技术检测小鼠血清中P.g特异性IgG抗体滴度。 3、通过单细胞测序技术分析小鼠主动脉组织中各类型巨噬细胞占比及其差异表达基因，并进行GO及KEGG富集分析。 4、通过免疫荧光检测小鼠主动脉巨噬细胞胞葬水平及其关键基因的表达。 5、体外构建胞葬经典模型及高脂模型，通过免疫荧光、实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、Western Blot 技术验证P.g对巨噬细胞胞葬功能的影响。 结果： 1、P.g诱导的慢性牙周炎小鼠的AS斑块面积和核心坏死程度显著增加，血清中P.g特异性抗体滴度升高，主动脉组织检测出存在P.g特异性DNA片段。 2、小鼠主动脉中巨噬细胞在所有类型的免疫细胞中占比最大，并且不同类型巨噬细胞的优势占比与斑块严重程度密切相关。 3、GO和KEGG富集结果显示，各组巨噬细胞的功能差异性主要体现在与炎症状态相关的胞葬功能，并且免疫荧光结果显示，P.g诱导的慢性牙周炎小鼠主动脉中巨噬细胞胞葬水平及其关键基因的表达显著降低。 4、体外实验证实了在P.g的刺激下，巨噬细胞胞葬功能及其关键基因的表达受到明显抑制。 结论： 本课题证实了 P.g诱导的慢性牙周炎小鼠中AS斑块面积和核心坏死程度增加。口腔接种的P.g可以入侵到达小鼠主动脉组织，并且导致小鼠产生全身性抗P.g的特异性IgG抗体。P.g诱导的慢性牙周炎小鼠主动脉中巨噬细胞胞葬水平及其关键基因的表达受到明显抑制，提示P.g通过抑制巨噬细胞胞葬功能促进AS的进展，为探究P.g促进AS进展的机制研究提供重要的理论基础。
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