摘要
玉蕈属作为离褶伞属分出来的一个属，该属的主要分属特征为属内成员均为木腐型真菌，其属内真菌大多呈肉质且具有较高食药用价值。目前，玉蕈属内所属物种的分类地位已趋于稳定且得到了广泛认同，但离褶伞属的分类较为混乱，系统发育关系仍存在较大争议。因此，结合形态学和分子系统学鉴定物种的方法已经得到了更为广泛的采纳。为解决玉蕈属及相关属部分物种的系统学归属问题，本文以传统的形态学研究为基础，辅以分子生物学，以期探讨玉蕈属及相关属真菌的系统发育关系及相关属真菌的分类学地位，并选择玉蕈属代表性物种榆干玉蕈进行成分分析、抗氧化活性分析和健脾药理活性研究。 本文通过野外采集玉蕈属及相关属真菌子实体并对其进行分离得到菌株，随后选取榆干玉蕈Hypsizygusulmarius(Bull.)Redhead对其生物学特性进行进一步探索和优化。在此基础上，对其初生代谢产物和活性成分的含量进行检测并探索其抗氧化活性，以明确其药用价值。利用榆干玉蕈不同极性有机溶剂提取物灌胃小鼠进行药理活性研究，以期为该属真菌的开发利用提供研究基础和新思路。 根据2021年至2023年期间野外采集到的共19份真菌标本，通过形态学观察及分子系统学研究将其分为两个属，分别为玉蕈属Hypsizygus和离褶伞属Lyophyllum，对属中的物种进行鉴定，将其分为五个种，分别为：榆干玉蕈H.ulmarius(Bull.)Redhead、玉蕈Hypsizygustessulatus(Bull.)Singer、荷叶离褶伞Lyophyllumdecastes(Fr.)Singer、白褐离褶伞Lyophyllumgangraenosum(Fr.)Gulden、角孢离褶伞LyophyllumsykosporumHongo＆Clémen?on。以榆树木屑配方为基础培养基，通过单因素实验，综合在固定时间内菌丝的生长速度及长势，初步确定了菌株的最适生长条件，通过4水平3因素的正交实验对榆干玉蕈进行生物学特性的研究，得出结论：在本文的实验范围中，对于榆干玉蕈菌丝最佳生长温度为15℃，pH为6～9，菌丝生长速度最快且菌丝较密的单因素为碳源20g蔗糖，氮源2g酵母膏，无机盐0.1g碳酸钙和生长因子1.5g麦粒（煮）。通过对榆干玉蕈液体发酵培养的单因素进行筛选可知其最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为硝酸铵，最佳无机盐为氯化钙。 通过对榆干玉蕈子实体的主要活性成分、营养成分、无机元素的含量进行测定，以及分析其活性成分抗氧化活性，评定其对人体健康具体的增益作用。测定榆干玉蕈的初生代谢物包括氨基酸、蛋白质、总糖、粗脂肪、粗纤维和灰分，测定结果表明榆干玉蕈中含有8种人体必需氨基酸中的7种，总糖含量、总脂肪含量和灰分含量明显高于市场售卖食用菌，同时其具有较低的粗纤维含量，说明其肉质厚嫩，适口性极佳；通过对其无机元素进行测定发现榆干玉蕈子实体中含有丰富的铁元素；在重金属元素的测定中榆干玉蕈子实体各项指标均未超标。通过紫外分光光度法测定活性成分多糖、黄酮、三萜及甾醇、酚酸的含量发现榆干玉蕈中多糖、三萜及甾醇的含量较高，分别为6.92%和0.88%；对其多糖成分进行自由基清除率的检测以及对铁离子还原力进行测定，发现榆干玉蕈多糖对羟基自由基、超氧阴离子自由基和铁离子还原力的抗氧化效果最好；总黄酮对DPPH自由基的清除率最佳，总三萜及甾醇对ABTS的清除率最佳。高浓度样品（1.0mg/mL）抗氧化效果与维生素C最接近，说明样品的抗氧化活性与浓度呈正相关，同时说明其活性成分具有良好的抗氧化活性。 榆干玉蕈的健脾活性实验中分别采用榆干玉蕈粉末、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物灌胃小鼠，测定其体质量，脾脏指数、肝脏指数、胸腺指数、胰腺指数，血清中免疫球蛋白M（immunoglobulinM，IgM）、白细胞介素2（Interleukin-2，IL-2）、白细胞介素6（Interleukin-6，IL-6）、干扰素γ（interferon-γ，IFN-γ）、D-木糖（D-xylose）、白蛋白（albumin，ALB）、胰脂肪酶（Pancrelipase，PL）含量，采用苏木素-伊红染色观察小鼠脾脏组织形态，采用RT-qPCR法检测维生素D结合蛋白（DBindingProtein，DBP）和紧密连接蛋白（occludin，OCLN）的mRNA表达情况，并采用WesternBlot方法检测DBP和OCLN表达情况，探究榆干玉蕈不同提取物对脾虚小鼠的健脾作用。结果表明：与模型组相比，第14d，各给药组小鼠体质量均显著增加。粉末提取物高剂量组脾脏指数显著增加；阳性组和榆干玉蕈所有处理组肝脏指数显著增加；粉末、石油醚、水提物高剂量组胸腺指数显著增加。所有给药组D-xylose、IFN-γ、ALB、IL-2、IgM、PL含量均显著增加，IL-6含量显著降低。各给药高剂量组DBP基因相对表达量显著升高，所有低剂量组显著降低；粉末低剂量组、石油醚提取物高和低剂量组、水提物高和低剂量组的OCLN基因相对表达量均显著升高。各给药组DBP和OCLN的蛋白表达量均显著升高。结论：榆干玉蕈子实体及各提取物均通过免疫调节作用及对消化腺体的调控等发挥了其健脾作用，为进一步开发利用提供参考。
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