摘要
目的：研究旨在探索纺锤体和着丝粒相关复合体亚基3（SKA3）在胆管癌发展中的作用及机制，为胆管癌的治疗及预测预后寻找潜在靶点。 方法：对配对的胆管癌组织和癌旁正常组织进行二代测序（NGS）。随后在TCGA数据库、GSE107943数据库及测序结果中确定胆管癌中功能未知的差异上调基因SKA3。采用RT-PCR，及免疫组织化学法检测胆管癌及配对癌旁组织中SKA3表达情况。运用小干扰及慢病毒载体转染胆管癌细胞株，构建胆管癌HuCCT1敲低细胞株及QBC939过表达细胞株。体外和体内实验检测缺氧条件下SKA3对胆管癌增殖能力的影响。通过RNA-seq寻找缺氧条件下SKA3调控胆管癌增殖的具体通路，IP/MS分析，Co-IP及蛋白免疫印迹实验分析来探索缺氧下SKA3调控HIF-1a表达的具体机制。 结果：SKA3在NGS、TCGA及GSE107943数据库中表达上调并与不良预后相关。体外和体内功能实验的结果显示低氧诱导的SKA3可促进胆管癌细胞增殖。对缺氧情况下SKA3敲低的胆管癌细胞系进行转录组测序，发现并验证缺氧情况下SKA3通过上调关键脂肪酸合成酶的表达以增强脂肪酸合成促进胆管癌细胞增殖。进一步的机制研究表明，在低氧条件下，SKA3募集PARP1与HIF-1a结合，从而增强HIF-1a的多聚ADP核糖基化（PARylation）。这种核糖基化增强了HIF-1a和USP7的结合，从而触发了缺氧条件下HIF-1a的去泛素化，以稳定HIF-1a的表达。组织芯片免疫组化染色结果进一步显示，SKA3与HIF-1a在胆管癌中高表达，且表达水平呈正相关。高表达SKA3及HIF-1a的CCA与手术后预后不良相关。 结论：在低氧条件下，SKA3通过PARP1/HIF-1a轴促进胆管癌细胞脂肪酸合成以促进其增殖。SKA3和HIF-1a高表达与术后不良预后相关。SKA3和HIF-1a可能是潜在的致癌基因，也是潜在的分析胆管癌患者预后的重要生物标志物。
NETL