摘要
目的：采用UPLC-Q-TOF-MS/MS方法，基于多重分析策略研究酸枣仁汤的化学成分；基于UPLC指纹图谱、网络药理学和定量分析相结合的研究策略，准确评价酸枣仁汤的质量。 方法： 1.基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定酸枣仁汤化学成分，采用WatersACQUITYUPLCBEHC18柱(2.1mm×100mm,1.7μm)，以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为0.2mL?min-1。采用信息依赖性采集模式（IDA）和动态背景扣除（DBS）的方法，在正、负离子模式下进行数据采集，通过建立化学成分谱库，利用Peakview分析软件与部分对照品图谱对比，根据精确相对分子质量和碎片离子分析，并结合相关文献检索及质谱裂解规律，分析推断酸枣仁汤中的化学成分，最后应用不同结构的化合物具有不同的ClogP值对同分异构体进行区分。 2.采用UPLC-PDA-ELSD技术，建立10批酸枣仁汤指纹图谱，对10批酸枣仁汤进行相似度评价和共有峰指认，采用化学模式识别进行分类评价，运用有监督模式偏最小二乘法判别分析筛选出造成组间差异的成分。 3.利用网络药理学方法预测酸枣仁汤治疗失眠、抑郁、焦虑的活性成分、潜在靶点和信号通路，筛选药效相关的化学成分，并采用分子对接验证。 4.基于网络药理学筛选的药效物质，建立UPLC-DAD-ELSD含量测定方法对酸枣仁汤进行质量控制。 结果: 1.采用上述方法共鉴定酸枣仁汤203个化合物，其中42个化合物来自酸枣仁，45个化合物来自川芎，48个化合物来自知母，20个化合物来自茯苓，84个化合物来自于甘草，18个化合物来自2味以上的药材。 2.通过10批酸枣仁汤指纹图谱分析，共得到32个共有峰，其中22种化学成分得到鉴定，采用化学模式识别分析将10批酸枣仁汤分为3组，并筛选得到多种差异成分。 3.通过网络药理学构建的中药-活性成分-靶点-疾病网络，从酸枣仁汤22个成分中筛选到与303个与抑郁、失眠及焦虑相关的靶点，结果显示，酸枣仁汤通过多种活性成分，作用于22个核心靶点，即AKT1，TNF，SRC，TP53，IL1B，STAT3，EGFR，ESR1，CASP3，PPARG，CTNNB1，PTGS2，HSP90AA1，GSK3B，MMP9，CREB1，ERBB2，APP，JAK2，MAPK1，NR3C1，ACE，涉及多条信号通路，主要包括化学致癌-受体激活通路，IL-17信号通路，TNF信号通路和雌激素信号通路等炎症相关的信号通路。通过分子对接技术发现酸枣仁汤中11种含量较高的活性成分与其所对应的核心靶点产生的蛋白具有良好的结合能力。 4.基于成分可测性和对照品的可获得性，选择贡献度较高的11种化合物作为药效关联物质进行含量测定，方法学验证结果表明11种被测化合物在检测范围内均具有良好的线性关系（r2＞0.994），精密度、准确度和稳定性均良好。 结论：本研究方法全面表征了酸枣仁汤的化学成分谱，为进一步研究其药效物质基础和质量控制提供了参考，同时也为其它中药化学成分的分析鉴定提供了借鉴。基于UPLC指纹图谱结合网络药理学及含量测定的方法简单、快速、准确、可靠，为中药活性成分的筛选和质量评价提供了思路。
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