摘要
目的： 重症急性胰腺炎（Severeacutepancreatitis,SAP）是临床实践中常见的腹部急危重症，有发病急、并发症多、死亡率高的特点，常分泌大量炎症因子诱导全身系统性炎症反应综合征，并发肝脏、肺脏、肠道及肾脏等多器官损伤。由于其解剖位置毗邻胰腺且接受胰腺血液回流，肝脏因此成为在SAP多脏器损伤中出现时间较早且发生率较高的器官。Toll样受体4（Tolllikereceptor4,TLR4）/核因子-κB（Nuclearfactorkappa-B,NF-κB）是经典的炎症通路，与SAP的发展密切相关。姜黄素（Curcumin,CUR）具有抗炎、抗氧化、抗癌等保护作用，可以介导TLR4/NF-κB信号通路抑制SAP炎症反应减轻胰腺损伤。但是，CUR在SAP诱导的相关肝损伤中的作用及其具体机制尚不完全清楚。该研究旨在探讨CUR对SAP相关肝脏损伤的影响以及发挥其作用的具体机制。 方法： 选取8周龄的健康雄性Sprague-Dawley大鼠50只，体重范围在200至250克之间。随机将其等分为5组：假手术组（SO）、重症急性胰腺炎组（SAP）、SAP+CUR预处理组（SAP+CUR）、SAP+CUR预处理+TLR4受体激活剂脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）组（SAP+CUR+LPS）、SAP+CUR预处理+TLR4受体抑制剂瑞沙托维（Resatorvid,TAK-242）组（SAP+CUR+TAK-242），10只各组。SAP+CUR组、SAP+CUR+LPS组及SAP+CUR+TAK-242组的大鼠分别给予CUR（200mg/kg）灌胃，SAP+CUR+LPS组和SAP+CUR+TAK-242组分别在CUR灌胃干预前30min腹腔注射TLR4激活剂LPS（0.1mg/kg）和TLR4抑制剂TAK-242（3mg/kg），SO组和SAP组分别给予相同剂量的0.9%氯化钠溶液灌胃及腹腔内注射。各组均给药1次/天，连续4周。除SO组接受手术操作但胰胆管内注射等量的生理盐水外，其余各组均通过向胰胆管逆行注射5%的牛磺胆酸钠来建立SAP大鼠模型。术后24h采集肝脏、胰腺组织以及下腔静脉血液以供后续分析。使用自动生化分析仪以检测大鼠血清中淀粉酶（Amylase,AMY）、脂肪酶（Lipase,LIPA）的活性水平；使用标准诊断试剂盒以检测丙氨酸氨基转移酶（Alanineaminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（Aspartateaminotransferase,AST）、肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor，TNF）-α、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、趋化因子（C-X-C基序）配体1（C-X-Cmotifchemokineligand1,CXCL1）的表达水平；苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色用以观察胰腺、肝脏的组织病理变化，同时进行病理损伤评分；通过WesternBlot检测半胱氨酸基天冬氨酸酶-3（Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、TLR4和p-NF-κBP65蛋白在肝脏的表达情况；使用TUNEL检测试剂盒以明确肝细胞的凋亡水平，并计算凋亡率；采用逆转录聚合酶链式反应（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,RT-PCR）技术来测定肝脏组织中TLR4、NF-κB相应的mRNA表达水平变化。 结果： 成功建立了SAP诱导的肝脏损伤大鼠模型后，所有血清及肝脏组织中损伤指标均显著升高。相较于SO组，SAP组大鼠的血清中AMY、LIPA、ALT、AST、TNF-α、IL-6的水平以及趋化因子CXCL1的表达显著升高（P＜0.05），同时肝组织中TNF-α、IL-6和CXCL1的表达也显著增加（P＜0.05）；表现出较严重的胰腺和肝脏组织病理损伤，且病理评分显著升高（P＜0.05）；凋亡相关蛋白Bax及Caspase-3表达水平显著上调，抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著下调，同时肝脏细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）；肝脏组织TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、p-NF-κBP65及相应mRNA水平显著增加（P＜0.05）。相反，SAP+CUR组与SAP组相比血清和或肝脏组织中AMY、LIPA、ALT、AST、TNF-α、IL-6及趋化因子CXCL1的表达水平显著降低（P＜0.05）；大鼠胰腺和肝脏组织表现出较轻的病理损伤及较低的病理学评分（P＜0.05）；Bax、Caspase-3蛋白表达显著下调，Bcl-2蛋白表达水平显著上调，肝脏细胞凋亡率显著下降（P＜0.05）；TLR4、p-NF-κBP65蛋白及相对应的mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）。与SAP+CUR组相比，LPS则能够显著逆转CUR对SAP诱导的肝损伤大鼠各检测指标的调控作用，TAK-242能够显著增强CUR对SAP诱导的肝损伤大鼠各检测指标的调控作用（P＜0.05）。 结论： 姜黄素能够通过下调TLR4/NF-κB信号传导通路减轻重症急性胰腺炎诱导的肝脏损伤，其机制与抑制炎症反应、减少肝细胞凋亡有关。
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