摘要
肠炎沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，在加工、运输、销售等各个环节均可污染食品，极易导致人类食物中毒，会诱发发热、恶心呕吐、腹泻、腹部绞痛等症状，对消费者身体健康造成严重威胁，因此建立肠炎沙门氏菌的快速灵敏检测方法非常有必要。免疫层析技术（Lateralflowimmunoassay,LFIA）是一种快速灵敏的免疫学检测方法，特异性强，操作简单，是常用的即时检测技术之一。为快速、简便、高敏、低成本地检测食品中的肠炎沙门氏菌，该研究以抗肠炎沙门氏菌的特异性抗体为识别分子，构建了2种简便高效的LFIA方法。主要研究内容和结果如下： 1.基于金纳米棒负载二氧化铈（AuNR@CeO2）类过氧化物纳米酶的双抗夹心免疫层析试纸条检测方法的研究：首先通过种子生长法合成金纳米棒（AuNRs），再利用水热法将二氧化铈（CeO2）负载到其表面即得AuNR@CeO2，对AuNR@CeO2纳米酶的类过氧化物酶活性分析，结果表明AuNRs@CeO2有广泛的类过氧化物酶活性，且与天然辣根过氧化物酶（HRP）相比，AuNRs@CeO2在极端pH、温度环境和贮存时间下的酶学稳定性更好。因此，可将其作为信号标签，利用类过氧化物酶的催化显色反应实现免疫层析分析的信号放大。优化工作条件后，该方法实现了检测限为102CFUmL-1的肠炎沙门氏菌灵敏检测。此外，对奶粉和猪肉样品的加标回收样品进行检测，检测限分别为103CFUmL-1和104CFUmL-1，添加回收率为76.0%~115.3%，表明所建立的方法在检测食品样品时，有良好的应用潜力。这一方法虽然能够实现肠炎沙门氏菌的灵敏检测，但依赖于高质量配对抗体，抗体筛选难度较大，抗体活性在后续标记过程中易受影响。因此，构建新的免标记LFIA方法有助于克服上述瓶颈。 2.基于右旋糖酐修饰二硫化钨功能性纳米片（D-WS2）的免标记免疫层析试纸条检测方法的研究：首先通过右旋糖酐辅助的液相剥离法制备了超薄小尺寸的D-WS2纳米片，D-WS2除了自身的比色性能外，还具有优异的拉曼信号，可为试纸条提供了多种信号输出模式。此外，D-WS2可以靶向细菌表面蛋白，因此可以直接作为信号探针替代双抗夹心模式中的捕获抗体，有效降低了开发成本。对工作条件优化后，该方法实现了对肠炎沙门氏菌的双信号灵敏检测，视觉检测限为103CFUmL-1，拉曼模式下的计算检测限为3CFUmL-1。此外，对饮用水和牛奶的加标回收样品检测的灵敏度均为103CFUmL-1，添加回收率为85.9%~118.4%，表明这一基于超薄功能性D-WS2纳米片的免标记免疫层析方法在检测食品样品时，有良好的应用潜力。 本研究所建立的2种免疫层析试纸条为食品中肠炎沙门氏菌的快速检测提供了有效的可参考方法，在食品样品中具有优异的检测效果，展现了免疫层析试纸条在肠炎沙门氏菌快速检测方面的巨大潜力，有望在食品安全快速检测领域实现应用。
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