摘要
目的：采用不同产地及采收期蒙药药用植物差巴嘎蒿乙醇提取物（ The ethanol extract of Artemisia halodendron，EAH）高效液相色谱（HPLC）指纹图谱和体内抗炎模型，建立谱效关系分析，探究差巴嘎蒿抗炎活性的药效物质基础。 方法：1.网络药理学方法预测差巴嘎蒿抗炎活性研究：首先通过已知文献报道及植物代谢组学数据获取差巴嘎蒿相关化学成分，利用Swiss ADME平台预测其化学结构，明确差巴嘎蒿活性成分，运用Swiss Target Prediction数据库获得差巴嘎蒿活性成分的作用靶点。从GeneCards、TTD及OMIM三个数据库筛选疾病靶点，获得药物与疾病共有靶点，并构建PPI网络，然后利用DAVID数据库进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。最后采用体内及体外实验进行验证； 2.基于血清代谢组学技术探讨差巴嘎蒿潜在抗炎活性物质基础研究：利用代谢组学数据，筛选空白血清与含药血清的差异代谢产物，探讨差巴嘎蒿发挥抗炎活性的潜在物质基础； 3.谱效关系研究：（1）建立不同产地及采收期差巴嘎蒿HPLC指纹图谱：将33批次不同产地及采收期差巴嘎蒿制备成供试品溶液，采用色谱条件WondaSil C18（250mm×4.6 mm,5μm）色谱柱，以甲醇（B）-0.2%甲酸水溶液（D）为流动相进行梯度洗脱，体积流量为0.8 mL/min，检测波长为288nm，柱温为30℃，进样量为10μL，进样时间为120min，建立不同产地及不同采收期差巴嘎蒿指纹图谱，用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》进行相似度分析，使用SPSS18.0软件进行聚类分析、主成分分析；（2）不同产地及采收期差巴嘎蒿抗炎活性研究：采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型，探讨33批次不同产地及采收期差巴嘎蒿抗炎活性；（3）谱效关系研究：采用灰色关联度分析方法，建立不同产地及采收期差巴嘎蒿药材HPLC指纹图谱共有峰峰面积与二甲苯致小鼠耳肿抗炎活性实验的肿胀抑制率的谱效关系，旨在探讨差巴嘎蒿发挥抗炎活性的主要贡献峰。 结果：1.网络药理学方法预测差巴嘎蒿抗炎活性研究结果：通过代谢组学数据及查阅文献共获得694个差巴嘎蒿的活性成分，主要包括黄酮类、酚类、萜类以及香豆素类等化合物，694个活性成分去重之后获得1355个相关靶点，从数据库获得13570个炎症相关靶点，其中差巴嘎蒿活性成分靶点与抗炎靶点共有1170个交集靶点，从中筛选出了383个核心靶点，包括IL-6、ALB、IL-1β、AKT1、TP53、TNF、GAPDH、CASP、STAT3等。GO功能富集分析和KEGG通路富集结果显示，关键靶点与1447种生物学过程（BP）、193种细胞组分（CC）和320种分子功能（MF）有关，涉及203条信号通路。体外、体内实验验证结果表明，差巴嘎蒿提取物可显著降低IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子的表达量（P＜0.05），差异具有统计学意义； 2.基于血清代谢组学技术探讨差巴嘎蒿潜在抗炎物质基础研究结果：空白血清与含药血清共筛选出84个差异代谢产物，其中包括41个黄酮类化合物、15个酚酸类以及少数的生物碱、萜类化合物等，为差巴嘎蒿潜在的抗炎活性成分； 3.谱效关系研究结果：（1）不同产地及采收期差巴嘎蒿HPLC指纹图谱的建立结果：指纹图谱中共匹配出12个共有峰，相似度评价结果显示，图谱相似度为0.839~0.994。主成分分析结果表明有3个主成分，其累计贡献率达到73.980%，提示差巴嘎蒿指纹图谱共有峰的大部分信息可以被这3个变量替代。经正交偏最小二乘法（OPLS-DA）分析筛选出6个影响差巴嘎蒿分组的成分，表明这些成分对区分不同产地及采收期差巴嘎蒿样品的贡献较大，可作为潜在标记物来评价差巴嘎蒿的质量差异；（2）差巴嘎蒿抗炎活性研究结果：采用二甲苯致小鼠耳肿胀度作为评估差巴嘎蒿抗炎活性的指标，通过肿胀度计算其肿胀抑制率。结果表明，差巴嘎蒿提取物可显著降低小鼠耳肿胀度及小鼠血清中的相关炎症因子（P＜0.05），差异具有统计学意义，表现出良好的抗炎活性；（3）谱效关系研究结果：采用灰色关联度分析方法建立谱效关系模型，结果表明，12个共有峰与药效关联度均大于0.6，其中峰12、峰9、峰10与其关联度最大，通过对照品比对指认出峰10为圣草酚-7-甲醚、峰12为异樱花素。将鉴定的两个成分与核心靶点进行了分子对接，发现两个成分与核心靶点均有较好的结合能。并且对其进行了含量测定，结果显示S12和S15两个批次圣草酚-7-甲醚的含量最高，S14和S15两个批次异樱花素的含量最高。 结论：本研究为探讨蒙药药用植物差巴嘎蒿抗炎活性物质基础，首先通过网络药理学的方法预测了差巴嘎蒿抗炎活性，并通过体外、体内实验进行了验证；在此基础上，通过血清代谢组学技术筛选出了差巴嘎蒿潜在抗炎活性物质；而后，基于不同产地及采收期差巴嘎蒿的HPLC指纹图谱数据，结合抗炎活性研究，采用灰色关联度分析法，建立了差巴嘎蒿抗炎活性的谱效关系。有效的分析了差巴嘎蒿抗炎活性药效成分，为差巴嘎蒿的抗炎活性物质基础提供依据的同时对差巴嘎蒿的质量控制方面的研究提供了更加全面的评价方法。
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