摘要
目的：利用阿片类药物诱发便秘（OIC）大鼠模型，探究远段结肠肌层肠小胶质细胞的极化特性及与OIC发生的相关性。 方法：将180~220 g SD大鼠随机分为正常组（NCG）、生理盐水组（NSG）和阿片类药物诱发便秘组（OIC），其中NCG大鼠正常饮食7 d，不进行任何干预；NSG大鼠腹腔注射生理盐水，连续7 d；OIC大鼠腹腔注射盐酸洛哌丁胺溶液（5 mg/kg），连续7 d。造模第1～7 d，每天称取三组大鼠的体重，计算大鼠体重增长量；收集造模结束12 h后三组大鼠的粪便，观察形状和性状并对粪便进行等级评分；经胃灌注印度墨水，观测三组大鼠结肠推进速度；运用免疫荧光组织化学双重标记观察肠小胶质细胞在远段结肠肌丛中的分布特点；运用RT-qPCR及Western Blot技术观测CD86、CD206等在远段结肠肌层的表达变化。体内施加米诺环素抑制肠小胶质细胞向M1型极化，运用肠功能学和Western Blot等方法检测肠运动功能和远段结肠肌层肠小胶质细胞相关蛋白的表达变化。 结果：模型制备第1~7 d，与NCG和NSG大鼠相比，OIC大鼠体重增长量较少（P＜0.05）；造模结束12 h后，观察OIC大鼠粪便表面凹凸不平、有裂缝，质地干硬，粪便等级评分低（P＜0.05）；造模7 d后，禁食不禁水12 h，OIC大鼠结肠推进速度明显降低（P＜0.05）；免疫荧光组织化学双重标记显示，在大鼠远段结肠肌丛内可见TMEM119、CD86和CD206表达的阳性细胞，NCG大鼠的阳性细胞胞体呈椭圆形， OIC大鼠的阳性细胞胞体多呈圆形，表面有较长的突起；CD86和CD206阳性细胞聚集分布，并且均有部分阳性细胞与TMEM119共存；RT-qPCR结果显示M1型相关基因CD86、iNOS和M2型相关基因CD206表达明显升高（P＜0.05），M2型相关基因Arg1表达无明显变化；Western Blot结果显示，OIC大鼠远段结肠肌层内肠小胶质细胞M1型相关蛋白CD86、iNOS、IL-1β和TNF-α表达明显增加（P＜0.05），M2型表型相关因子CD206的表达明显增加（P＜0.05），Arg1、IL-4和IL-10表达无明显变化，神经递质VIP和ATPB表达明显减少（P＜0.05）。施加米诺环素（Mino）干预后，Western Blot结果显示，与OIC大鼠相比， LOP+Mino结肠肌层M1型相关蛋白CD86与促炎因子IL-1β和TNF-α表达明显减少（P＜0.05），M2型相关蛋白CD206与抗炎因子IL-4和IL-10无明显变化，VIP和ATPB表达明显增多（P＜0.05）。 结论：在OIC大鼠结肠肌丛内，肠小胶质细胞主要以M1型极化为主，减少抑制性神经递质释放，引起结肠运动功能障碍。
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