摘要
猪流感（Swine influenza，SI）是一种由猪流感病毒（Swine influenza virus, SIV）所引起猪的急性、高度传染性的呼吸系统疾病。猪作为人类流感病毒与禽流感病毒的共同易感宿主，成为了流感病毒 8个基因片段重排的“混合器”。SIV对养猪业造成重要危害的同时，也对公共卫生产生了深远的影响。有研究结果表明，SIV 在遗传上呈现多样性，且存在不断变异的趋势，给公共卫生带来威胁。本研究旨在深入了解广东地区SIV的遗传进化规律以及致病性，为SI的预防和控制提供科学依据和理论支持。本研究主要包括以下4部分： 1、从2021-2023年在广东省部分地区猪场采集疑似感染SIV的猪鼻拭子和肺脏病料共计536份。通过荧光定量RT-PCR检测出118份SIV阳性样品，将Ct值低于 30 的 45 份鼻拭子和肺组织样品接种鸡胚进行病毒分离鉴定，结果共分离到5株SIV（分离率为11.1％），其中3株H1N1亚型（SWSG1/21、WCJM2/22、SWHRZ3/22）和 2株 H1N2亚型（SWLFT4/22、SWHH5/23）。5株经蚀斑纯化的SIV分离株在MDCK细胞中测定一步生长曲线，滴度为6.27-7.62 lgTCID50/0.1 mL，且在 36 h达到复制顶峰。 2、将5株蚀斑纯化的SIV分离株进行全基因组测序，构建系统发育树进行遗传演化分析发现：3株H1N1亚型SIV（SWSG1/21、WCJM2/22、SWHRZ3/22）均属G4基因型EA H1N1亚型，HA和NA基因源自EA分支，PB2、PA、PB1、NP和 M基因源自 pdm/09分支，NS基因源于 TR H1N2分支。而 2株 H1N2亚型均是重排毒株：SWLFT4/22 是由 North American H1N2 分支和 pdm/09 H1N1分支的毒株重排；SWHH5/23是由 North American H1N2分支、pdm/09 H1N1分支和 EA H1N1分支等三个分支的毒株重排而来。这 2种基因重排方式目前均未见报道，这表明猪群中H1N2亚型SIV基因重排表现为多样性。 3、SIV分离株关键氨基酸位点分析发现：5株 SIV分离株的 HA蛋白裂解位点均为 PSIQSR↓GL，具有低致病性流感病毒的特征；HA 蛋白的受体结合位点发生了 E190D 的突变。NA 蛋白氨基酸序列分析发现：3 株 H1N1 分离株（SWSG1/21、SWCJM2/22、SWHRZ3/22）发生了 H274Y突变；2株 H1N2分离株（SWLFT4/22与SWHH5/23）的第274位氨基酸为Q。5株SIV分离株关键氨基酸位点中多处发生与小鼠毒力相关增强的突变：PB2蛋白T271A、A590S、A591R、T431M、T588I；PB1蛋白H436Y；PA蛋白P224S、L295P。 4、SIV分离株对小鼠致病性试验：5株SIV分离株攻毒BALB/c小鼠全部出现了精神萎靡、被毛粗乱，并导致不同程度的体质量减轻（20-35％），9 d后体质量开始逐渐上升。SWSG1/21、SWCJM2/22和SWLFT4/22的致病性较强，小鼠死亡率为 100％；SWHH5/23 的死亡率为 66.6％；SWHRZ3/22 的死亡率为33.3％。病理学检测结果显示，5株SIV分离株均引起小鼠肺组织明显的病理变化，初期表现为充血和水肿，后期大量炎性细胞浸润、肺泡壁增厚、肺泡腔缩小、肺间质纤维化，其中SWCJM2/22（H1N1）和SWLFT4/22（H1N2）的病理变化最明显。采用荧光定量RT-PCR检测SIV分离株感染小鼠各个脏器的病毒载量，结果发现，SIV 在肺脏中的病毒载量最高，其次是鼻甲，而在心脏、肝脏、脾脏、肾脏没有检测到SIV。 综上所述，本研究通过对广东省佛山、肇庆、清远、韶关等地猪场采集的猪鼻拭子和肺脏组织病料进行了病毒分离鉴定、遗传进化分析、关键氨基酸位点分析以及致病性试验，研究结果丰富了广东省 SI流行病学内容，加深了我们对 SIV 流行现状的了解，对于维护公共卫生安全和制定全面有效的综合防控策略具有重要意义。
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