摘要
腹泻是犊牛的常发病，该病可造成犊牛的大量死亡，是制约我国乃至世界养牛业发展的重大阻碍。90%犊牛腹泻是由致病性大肠杆菌引起，临床主要采用的抗生素疗法可导致细菌产生耐药性，往往影响防控效果和引起二次危害。中药作用具有多靶性、不易引起细菌耐药性等优势成为治疗犊牛腹泻的研究热点。本文利用体外抑菌试验筛选中药组方，通过大肠杆菌致小鼠腹泻模型研究中药组方治疗效果，研究结果如下： 1.致犊牛腹泻大肠杆菌分离鉴定。利用拭子从河北省牛场采集的犊牛腹泻样品，通过生化试验、16SrRNAPCR扩增和测序鉴定10株大肠杆菌。通过检测7种毒力基因，证实2株大肠杆菌(编号为G1、G2)携带致犊牛腹泻优势毒力因子F17，其中G1为致病性大肠杆菌。 2.大肠杆菌致小鼠腹泻模型的构建。选择90只小鼠随机分成5组，试验组分别腹腔注射0.5mL浓度为1.0×106CFU/mL、1.0×107CFU/mL、1.0×108CFU/mL、1.0×109CFU/mL大肠杆菌(G1)悬液，通过观察小鼠临床症状，统计小鼠腹泻指数，确定大肠杆菌致小鼠腹泻模型最佳浓度为1.0×108CFU/mL。 3.中药组方的筛选。用微量稀释法分别测定14味中药水提物对大肠杆菌(G1)MIC，利用琼脂打孔法测定14味中药水提物抑菌圈直径。根据单味中药体外抑菌效果进行组方，再测定中药组方水提物MIC和抑菌圈直径，结果显示中药组方2体外抑菌效果优于中药组方1。 4.中药组方对腹泻小鼠的治疗效果。将162只小鼠分为9组，处理小鼠出现腹泻后，给试验小鼠分别灌喂0.2mL中药组方1(1.5g/mL、1.0 g/mL、0.5g/mL)、中药组方2(1.5g/mL、1.0 g/mL、0.5g/mL)，持续7天。治疗第3天时统计腹泻指数；治疗第7天剖检小鼠，检测小肠病理变化，利用ELISA法检测回肠肠黏膜免疫球蛋白sIgA、pIgR含量，利用qPCR检测十二指肠Claudin-1、Occludin和ZO-1的mRNA相对表达量。结果显示，中药组方2对腹泻小鼠治疗效果显著，可降低小鼠腹泻指数，修复肠绒毛损伤；和西药组相比，对腹泻小鼠的增重、肠组织免疫球蛋白水平和紧密连接蛋白mRNA相对表达量无显著性差异(P＜0.05)。 综上所述，通过体外抑菌试验和动物体内试验，筛选的2个中药组方对犊牛源性大肠杆菌致小鼠腹泻均有治疗效果，可降低小鼠腹泻指数，改善肠道病理损伤，为中药治疗大肠杆菌致犊牛腹泻提供参考依据。
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