摘要
乳铁蛋白具有促进神经发育和维护婴幼儿胃肠道健康等功能，作为食品营养强化剂，对其有严格的添加限量标准。β-乳球蛋白是必需氨基酸的来源，具有增强免疫的功能，但会引起部分儿童发生过敏。本研究以乳铁蛋白和β-乳球蛋白作为目标物，以特异性强、亲和力高的适配体作为生物识别元件，利用酶催化显色产生的可视化光学信号，构建了酶联适配体比色传感器并分别应用于乳制品中乳铁蛋白和β-乳球蛋白的快速检测。本研究主要内容及结论如下： (1)建立了一种竞争型酶联适配体比色传感器检测乳制品中乳铁蛋白。将乳铁蛋白标准品包被在微孔板中作为捕获基底，通过链霉亲和素与生物素的结合将乳铁蛋白适配体与酶链接作为检测探针，通过测量TMB在450nm处的吸光度值对乳铁蛋白进行定性与定量检测。探究了竞争型酶联适配体比色传感器的最优检测条件及检测性能。结果表明，在实际样品基质体系中，乳铁蛋白浓度在50~300nmol/L范围内表现出良好线性关系，检出限为24.45nmol/L。此外，该比色传感器具有良好的选择性，并成功应用于奶粉中的乳铁蛋白检测，回收率为91.3~115.4%，并与高效毛细管电泳方法的检测结果相比一致率为94.39~101.5%，表明该方法具有良好的准确性。 (2)建立了一种夹心型酶联适配体比色传感器检测乳制品中的β-乳球蛋白。通过生物素-链霉亲和素作用，将生物素-适配体1固定在修饰有链霉亲和素微孔板表面作为捕获基底，辣根过氧化物酶-(链霉亲和素-生物素)-适配体2作为检测探针，通过测量TMB在450nm处的吸光度值对β-乳球蛋白进行定性与定量检测。探究了夹心型酶联适配体比色传感器的最优检测条件及检测性能。结果表明，该方法对乳制品中β-乳球蛋白的线性范围为200~1200nmol/L，检出限为54.5nmol/L。此外，该比色传感器具有良好的选择性，并成功应用于实际样品中β-乳球蛋白检测，回收率为95.71~103.75%。这两种检测方法具有操作简单、灵敏性高和特异性强等优点，能够为乳制品中的功能性蛋白检测提供新的思路。
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