摘要
目的： 1.观察不同浓度桃仁-红花对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)的增殖情况，以及对HUVEC细胞体外形成血管的情况，筛选桃仁-红花药对促进血管形成和成骨分化的最佳浓度。 2.通过使用最佳浓度的桃仁-红花药对对HUVEC细胞和MC3T3-E1细胞相关因子的mRNA表达，研究桃仁-红花药对对成骨分化、血管形成的作用和机制。 3.通过体内实验观察桃仁-红花药对对大鼠骨缺损模型的血管生成情况和成骨质量，以及相关因子的mRNA和蛋白表达，研究桃仁-红花药对对骨缺损的血管形成和成骨分化的作用及机制。 方法： 1.体外实验以不同浓度桃仁-红花对HUVEC细胞和MC3T3-E1细胞进行干预，进行CCK-8细胞增殖检测，观察不同浓度桃仁-红花对HUVEC细胞和MC3T3-E1细胞的增殖情况。通过成管实验，观察不同浓度桃仁-红花对HUVEC细胞体外血管形成的情况，筛选出最佳浓度。 2.体外实验通过PCR检测最佳浓度的桃仁-红花干预下，HUVEC细胞和MC3T3-E1细胞的CD31、VEGF、BMP-2、RUNX2、OPN表达情况，研究桃仁-红花对成骨成血管的作用和机制。 3.体内实验通过制作大鼠骨缺损模型，桃仁-红花中药药液灌胃2周后，通过HE染色和Goldner三色法染色、Micro-CT对骨缺损修复情况进行评估。 4.体内实验通过PCR检测大鼠体内CD31、VEGF、BMP-2、RUNX2、OPN的基因表达情况，并对骨组织进行免疫组化染色检测CD31、VEGF、BMP-2的表达，研究桃仁-红花药对对大鼠骨缺损模型成骨成血管的作用和机制。 结果： 1.(1)CCK-8检测结果显示，与空白对照组相比，不同浓度的桃仁-红花干预的HUVEC细胞和MC3T3-E1细胞体外增殖水平均升高；(2)成管实验结果显示，桃仁-红花促进HUVEC细胞体外形成血管的能力，但浓度为400μg/ml时，HUVEC细胞体外形成血管的能力明显受到抑制，结合CCK-8结果得出最佳浓度为100μg/ml；(3)PCR结果显示，与空白组相比，桃仁-红花药对处理的HUVEC细胞的成血管相关标志物(VEGF)和MC3T3-E1细胞的成血管相关标志物(VEGF)、成骨相关标志物(BMP-2、RUNX2)的mRNA表达水平均明显升高。 2.(1)Micro-CT、HE染色、Goldner染色结果显示，与骨缺损组相比，骨缺损+中药组的骨缺损区骨体积分数(BV/TV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨矿化程度均明显增加；(2)PCR结果显示，骨缺损+中药组的成血管相关标志物(CD31)的mRNA表达水平明显升高，成血管相关标志物(VEGF)和成骨相关标志物(OPN)的mRNA表达水平稍升高，但差异无统计学意义；(3)免疫组化染色结果显示，桃仁-红花药对上调了成骨相关标志物(BMP-2)的蛋白表达水平。 结论： 桃仁-红花药对可上调成血管相关标志物的mRNA表达促进血管生成，从而影响使BMP-2的蛋白表达升高，进而促进成骨。这肯定了骨缺损的成骨与成血管之间在桃仁-红花药对的作用下存在联系。
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