摘要
帕金森病(Parkinson's disease, PD)作为一种常见的神经退行性疾病，其特征性的病理变化包括多巴胺能神经元丢失、α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-syn)异常聚集及小胶质细胞激活等。小胶质细胞作为调控脑内免疫炎症的关键细胞，在PD发生发展中起到重要作用。髓样细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2, TREM2)在脑内小胶质细胞具有特异性高表达，可识别脑内微环境异常聚集蛋白和细胞碎片，调控小胶质细胞吞噬功能和神经炎症反应。细胞碎片以细胞膜和细胞器为主，主要成分包含脂质和类脂质。PD脑内存在大量异常聚集蛋白和细胞碎片，伴随脂质代谢紊乱。全基因组关联研究(Genome-Wide Association Studies, GWAS)研究表明TREM2基因上多个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)与PD罹患风险相关。目前，TREM2受体在PD致病过程中的角色逐渐受到重视，但其在脂质调控中的作用和机制尚未明确。探索TREM2调控小胶质细胞功能介导脑内脂质代谢的机制，对于理解PD病变过程和开发诊治新策略具有重要意义。 在本研究中，我们利用重组腺相关病毒9(recombinant adeno-associated virus, rAAV9)转染人A53T致病蛋白(rAAV9-A53T)，在野生型及TREM2基因全敲除鼠的双侧黑质区进行立体定位注射，以构建双侧多巴胺能递质系统损伤的晚期PD动物模型。为了全面评估小鼠的运动功能，我们实施一系列行为学测试，包括悬挂实验、爬杆实验和转棒实验等，观察小鼠运动协调性和平衡能力变化。我们采用蛋白印迹法(Western Blot, WB)、免疫组化和免疫荧光技术，检测脑内α-syn异常聚集、多巴胺能神经元损伤以及小胶质细胞状态，以评估脑内黑质纹状体区神经元损伤和炎症紊乱状况。为了明确脑组织损伤情况，我们检测脑细胞线粒体DNA中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)和丙二醛(m alondialdehyde, MDA)评估脑内氧化应激和脂质过氧化反应水平。此外，为了了解外周系统脂质代谢改变对中枢系统脂质代谢的影响，我们首先对肝脏进行了苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色，以明确肝脏参与的外周系统脂质代谢改变情况；其次，利用油红O染色技术对肝脏和小鼠胸腹主动脉进行了染色，评估外周系统脂质代谢对肝脏和循环系统大血管的影响；综合评估TREM2受体在外周系统脂质代谢中的功能。为了明确小胶质细胞吞噬清除脑内脂质的作用，我们采用透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)技术，观察脑内小胶质细胞体内细胞器形态和脂褐素沉积情况。为了总体评估脑内脂质代谢状况，我们采用液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)对小鼠脑组织脂质代谢物进行定性和定量分析。最后，我们采用蛋白质组学中的数据独立采集(Data-Independent Acquisition, DIA)技术对脑组织中的脂质代谢相关蛋白进行定量分析，为揭示TREM2受体在PD脑内脂质代谢调控中的作用和机制提供参考。
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