摘要
羊肚菌(Morchella)是珍贵的食药用真菌，备受人们喜爱，人工栽培面积逐年扩大。由于羊肚菌还无法采用可控的室内栽培技术，因而一直采用室外不可控的大田栽培技术，但该技术易使羊肚菌受到多种病原菌的侵染。常规的防治措施不能有效控制病害的发展，因此寻找安全且高效的生防措施刻不容缓。本研究从羊肚菌柄际土壤中分离筛选出对羊肚菌枯萎病病原菌棕榈拟盘多毛孢(Pestalotiopsis trachicarpicola)具有较高抑制作用的两株拮抗放线菌菌株，对拮抗菌株进行种属鉴定，探讨了拮抗菌株最优发酵配方及条件，测定了发酵滤液的稳定性及抑菌活性，并在大田栽培试验中探究了拮抗菌株发酵滤液对棕榈拟盘多毛孢的防治效果，为羊肚菌病原菌棕榈拟盘多毛孢的生物防治提供一定的研究基础。主要研究结果如下： (1)拮抗放线菌的分离及鉴定。本试验采用稀释涂布平板法，从羊肚菌柄际土壤中分离出29株放线菌。以棕榈拟盘多毛孢为指示菌，经平板对峙试验筛选出抑菌率大于50%的6株拮抗放线菌；利用含药平板法复筛，结合初筛结果，确定菌株F16、F19为拮抗优势菌株。通过形态学特征、培养特征观察及生理生化特性，确定两拮抗菌株为链霉菌属，结合16SrRNA基因序列分析结果，将菌株F16初步鉴定为娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)，菌株F19初步鉴定为三色链霉菌(Streptomyces tricolor)。 (2)拮抗放线菌发酵配方及条件优化。以棕榈拟盘多毛孢为指示菌，通过单因素试验及正交试验，探究拮抗菌株F16、F19最优发酵配方及发酵条件。得出菌株F16最优发酵配方为小米20g/L、蔗糖20g/L、蛋白胨15g/L、氯化钠10g/L、碳酸钙8g/L，抑制率为89.33%；菌株F19为小米20g/L、葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、碳酸钙6g/L，抑制率为76.78%。菌株F16在温度28℃、起始pH5、瓶装量100/250mL、发酵3d时抑菌活性最高，菌株F19在温度28℃、起始pH7、瓶装量100/250mL、发酵5d时抑菌活性最高。 (3)拮抗放线菌发酵滤液稳定性测定。菌株F16的发酵滤液具有良好的热稳定性、酸碱稳定性、紫外稳定性及储存稳定性；菌株F19的发酵滤液亦具有良好的酸碱稳定性及紫外稳定性，热稳定性较差，在4℃及28℃下储存，抑菌活性下降较快。 (4)拮抗放线菌发酵滤液抑菌活性测定。在拮抗菌株与病原菌双重皿培养试验中，拮抗菌株挥发性物质可抑制病原菌分生孢子产生。与单株菌株发酵滤液相比，拮抗菌株发酵滤液复配液对病原菌的抑菌效果相比差异不显著。拮抗菌株稀释5倍-100倍的发酵滤液均能抑制病原菌分生孢子萌发，菌株F16、F19的发酵滤液稀释50倍时对病原菌仍有较高抑制效果，抑菌率分别为66.93%、49.22%。 (5)探索了拮抗菌株发酵滤液在羊肚菌子实体上及大田栽培试验条件下对病原菌的抑制作用。在羊肚菌子实体上，发酵滤液能抑制病原菌的生长。在大田栽培试验中，样地YB64及YB94(分别施加了菌株F16、F19发酵滤液5倍稀释液)羊肚菌产量为299.6g/m2、277.65g/m2，高于样地CK(只接种羊肚菌)羊肚菌的产量231g/m2，远高于样地YB(只施加病原菌)羊肚菌的产量的134.93g/m2。因此，拮抗菌株发酵滤液能防治棕榈拟盘多毛孢导致的羊肚菌枯萎病。
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