摘要
真菌次级代谢是天然药物开发的重要来源，有多种临床药物来源于真菌次级代谢产物。随着对真菌次级代谢产物研究的不断深入，一般环境中分离得到的真菌，其次级代谢产物中发现新颖结构化合物的难度越来越大，因此，诸多学者将研究重点转向了特境真菌次级代谢产物的研究上。广西壮族自治区属热带和亚热带季风气候，草本植物资源充足，且境内喀斯特地貌分布十分广泛，因此，以广西草本资源和地形特点为依托，挖掘广西特境真菌次级代谢产物资源，为天然药物研发提供更多先导化合物。 本文对落花生根内生真菌和溶洞真菌两株特境真菌的次级代谢产物展开研究，在课题组前期筛选工作的基础上，分别对两株真菌进行规模发酵，其中落花生根内生真菌先后进行大米培养基和真菌二号培养基规模发酵，溶洞真菌则采用大米培养基进行发酵。经菌株鉴定，落花生根内生真菌确定为Fusariumsp.LHS-P1-3，溶洞真菌确定为Roussoellasp.L-C-P1-2。 对发酵所得粗体物均采用乙酸乙酯进行萃取，对所得粗浸膏使用石油醚：甲醇(90%)=1:1进行二次萃取，利用高效液相色谱(HPLC)进行粗提物丰富度分析，对丰富度较高的浸膏进行分离。使用正、反相硅胶色谱柱对浸膏分别进行分段处理，使用高流速制备和半制备HPLC对各组分进行分离纯化，从而得到单一化合物。利用核磁共振波谱(NMR)对其平面结构进行初步鉴定，对新结构化合物使用高分辨质谱(HRMS)、紫外分光光度计(UV)、红外光谱仪(IR)、旋光度仪、X单晶衍射以及电子圆二色谱(ECD)进行绝对构型确定。自两株真菌发酵粗提物中共分离得到18个化合物，其中落花生内生真菌发酵物分离得到3个新化合物和9个已知化合物(1~12)，溶洞真菌发酵产物则分离得到3个新结构化合物、1个新天然产物以及2个已知化合物(13~18)；对分离得到的化合物进行生物活性测试，其中化合物2、4和化合物8-10均对人肝癌细胞、人宫颈癌细胞以及人结肠癌细胞等几种肿瘤细胞有抑制活性，新化合物2对人肝癌细胞的抑制活性优于阳性药苏尼替尼，化合物8对人肝癌细胞、人结肠癌细胞以及人宫颈癌细胞的抑制活性同样优于阳性药苏尼替尼，化合物4对人肝癌细胞的抑制活性与阳性药苏尼替尼相当。此外，化合物8和化合物10还对固胆固醇蛋白具有抑制活性。
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