摘要
锤舌菌纲（Leotiomycetes）隶属于真菌界（Fungi）、子囊菌门（Ascomycota）、盘菌亚门（Pezizomycotina）。该纲目前包括19个目和目级分类单元、53个科及14个科级分类单元、约580个属，是子囊菌门中多样性最高的纲之一。根据已有数据估计，锤舌菌纲中大约包含80000个种，目前已发表的物种数量在4407-5587之间，仅占预估物种数量的5%-7%。此外，锤舌菌纲中具有丰富的物种多样性，一些类群可以产生结构复杂、活性广泛的次级代谢产物，在植物病虫害防治等领域具有巨大的开发潜力。 本研究对分离自明永冰川、白马雪山等低温生境的244株锤舌菌纲真菌进行系统发育分析以及形态学研究。综合形态学、分子系统学、遗传学等学科的理论和方法，利用ABGD、ASAP、PTP、GMYC四种物种界定方法对本研究菌株进行物种划分，并以分歧时间为标尺确定未知类群的高级分类阶元。同时，对具高抑菌活性菌株的次级代谢产物进行了研究。主要研究结果如下： （1）基于ITS、SSU、LSU、RPB2和TEF1-α共5个基因片段，使用最大似然法和最大简约法构建系统发育树，初步确定研究菌株的分类地位，两种方法构建的系统发育树拓扑结构基本一致。系统发育结果显示，本研究所用菌株分布于7个目（Erysiphales、Helicogoniales、Helotiales、Leotiales、Phacidiales、Sclerotiniales和Thelebolales），18个科，37个属中，其中柔膜菌目为优势目。 （2）对各分类群利用贝叶斯和最大似然法基于多基因串联序列构建系统发育树，结合ABGD、ASAP、PTP和GMYC等方法推测的分类单元和形态学特征，初步鉴定出疑似新种共计77个，并分别进行了详细的命名和描述。对54株分类地位未定的菌株，采用Beast软件推测出各类群的分歧时间，结果显示，54株菌株中包含7个新属。 （3）通过平板对峙法筛选出19株对病原指示菌有抑制效果的菌株，分别对其次级代谢产物进行抑制活性测定和薄层色谱分析，最终选择对八种病原真菌和七种病原细菌都具有明显抑制效果的假裸囊属（Pseudogymnoascus）疑似新种MY1148作为出发菌株。对其发酵产物初步分离后，采用滤纸片法对各组分进行活性追踪，结果显示仅有组分3(石油醚∶乙酸乙酯=4∶1)具有明显的抑菌效果，所以优先分离该组分。 （4）综合采用多种分离方法，共分离出7个化合物，结构鉴定结果显示分别为麦角甾醇（ergosta-5,7,22-trien-3β-ol）、Diorcinol（3,3'-dihydroxy-5,5'-dimethyldiphenyl ether）、(Z)-5-acetoxy-3-methyipent-2-enoic acid、曲地酸乙酯（ethyl asterrate）、xylitol、2′-hydroxy bisdechlorogeodin、曲地酸（asterric acid）。其中Diorcinol为组分3中的主要产物。 （5）对7个化合物采用滤纸片法进行抑菌活性测定，结果显示Diorcinol对十五种病原指示菌都具有明显的抑菌效果，曲地酸乙酯和曲地酸对几种病原细菌有轻微抑制效果，由此推断MY1148次级代谢产物中，起主要抑菌作用的为二苯醚类化合物，Diorcinol为主要抑菌物质。
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