摘要
目 的：本研究以糖尿病皮肤溃疡模型小鼠为研究对象，检测其皮肤创面愈合过程中miR-129、miR-335、SP1、MMP-9等关键分子的表达变化，旨在揭示一效膏促进糖尿病皮肤溃疡愈合的潜在分子机制，为临床治疗提供理论基础和参考方法。材料与方法：63只SPF级昆明种雄性小鼠，随机分为两组：正常对照组15只、糖尿病造模组48只。实验开始前一天，所有小鼠都禁食12个小时。次日，除正常对照组外，其余糖尿病造模组小鼠均通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型。STZ注射72小时后，以血糖≥16.7 mmol/L的标准确认模型，至少通过2次随机血糖测试即算成功。将糖尿病造模成功的小鼠随机分为造模对照组、一效膏组、康复新液组三组。将所有实验小鼠麻醉后剃除背部毛发，于小鼠腰背正中线位置用皮肤打孔器制备圆形全层皮肤缺损，直径1 cm，模拟糖尿病皮肤溃疡。采用无菌生理盐水处理正常对照组和模型对照组创面。分别用康复新液、一效膏外用治疗康复新液组和一效膏组小鼠创面，每日1次外用，连续14天。每天监测小鼠的健康状态和创面愈合情况。换药第14天时，对创面进行摄影，使用ImageJ软件测量创面面积，计算愈合率。采集创面样本，运用HE染色进行组织病理学观察，运用Masson染色进行组织内胶原纤维观察。使用RT-qPCR、Western Blot和Elisa法检测miR-129、miR-335、SP1和MMP-9的表达水平，并采用SPSS17.0进行数据分析。 结果：①STZ注射后，糖尿病造模组小鼠的空腹血糖显著高于正常对照组（Plt;0.01）。治疗期间，糖尿病造模组小鼠表现出典型症状，如体重减轻、精神不振、毛发暗淡、反应迟钝，以及饮食和尿量增加。14天后，糖尿病造模组小鼠的空腹血糖和体重与正常对照组相比有显著差异（Plt;0.01）。②换药14天后，与正常对照组相比，模型对照组的创面愈合率显著减低（Plt;0.01）。康复新液组与一效膏组的创面愈合率相比模型对照组显著提高（Plt;0.01）。一效膏组创面愈合率高于康复新液组（Plt;0.05）。③HE染色结果：模型对照组与正常对照组相比表皮层较薄且不连续，真皮层薄，增生组织较少且主要为疏松的纤维组织，成纤维细胞较少，纤维细胞分布不均，新生血管较少，炎症细胞浸润明显且主要为淋巴细胞与中性粒细胞。康复新液组可见表皮层与真皮层较厚，增生结缔组织数量相对多，纤维组织密集，成纤维细胞数量较多，纤维细胞比较成熟，新生血管数量较多，有一定的炎症细胞浸润。一效膏组可见表皮层与真皮层较厚，增生结缔组织数量较多，成纤维细胞数量较多，纤维细胞较为成熟，新生血管较多，炎症细胞浸润较少。④Masson染色结果：模型对照组与正常对照组相比胶原纤维增生少，分布稀疏，排列凌乱，染色不均，色泽较淡。康复新液组胶原纤维增生较少，排列不够整齐稍显凌乱，染色较为一致，色泽略浅。一效膏组胶原纤维增生较多，排列相对整齐，染色均匀，色泽鲜明。⑤通过RT-qPCR分析发现，模型对照组中miR-129与miR-335的表达显著低于正常对照组（Plt;0.01），相比之下，康复新液组和一效膏组中这两种miRNA的表达明显升高，与模型对照组形成显著差异（Plt;0.01）。⑥通过Western Blot和ELISA方法检测发现，模型对照组的SP1蛋白表达水平明显高于正常对照组（Plt;0.01）。相较于模型对照组，康复新液组和一效膏组的SP1的表达明显降低（Plt;0.01）。模型对照组的MMP-9表达水平显著高于正常对照组（Plt;0.01）。相较于模型对照组，康复新液组和一效膏组均显著降低了MMP-9的表达（Plt;0.01）。 结论： 1 一效膏的外部应用显著提高了糖尿病模型小鼠皮肤溃疡的愈合效率，从而加快了糖尿病相关创面的恢复过程，其治疗效果不劣于康复新液。 2 一效膏促进糖尿病皮肤溃疡愈合的机制部分归因于其在创面组织中上调miR-129与miR-335的表达，并下调SP1与MMP-9蛋白的水平，与康复新液类似。
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