摘要
研究背景：根据2020全球数据统计显示，肺癌是最常见的癌症之一，其发病率为11.4%，死亡率为18.0%。肺癌的发展与肿瘤微环境有着密切联系，肿瘤微环境由肿瘤细胞、基质细胞以及相关细胞因子组成，这些基质细胞包括巨噬细胞、T淋巴细胞及成纤维细胞等。肿瘤微环境中的巨噬细胞被称为肿瘤相关巨噬细胞，可被激活和分化成M1型、M2型肿瘤相关巨噬细胞，其中M2型肿瘤相关巨噬细胞主要表达IL-10、IL4、精氨酸酶一1(Arg-l)、CD163、CD206和调节免疫反应所需的其他酶或细胞因子。含src同源2结构域酪氨酸磷酸酶2(srchomologous domain tyrosine phosphatase 2，SHP2)在肿瘤的发生发展、炎症、转录调节和细胞迁移中起重要作用。有学者证实，结直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞SHP2的缺失可促进M2型肿瘤相关巨噬细胞的极化，但对于肺癌中TAMs表达的SHP2与其极化关系的研究， 目前国内外还尚未见报道。为此，我们提出SHP2能否调节肺癌中肿瘤相关巨噬细胞的极化。 研究目的： 体外间接共培养肺癌细胞及人外周血单核细胞系THP-1(Human myeloid leukemia mononuclear cells)，探究共培养对THP-I表达的SHP2、CD163、CD206的影响，以及SHP2对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响。 研究方法： 1．先用佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）刺激THP-1 24h 成为巨噬细胞（ M0） ，洗涤后用 1640 完全培基恢复24h ，再用肺癌细胞上清液即条件培养培基（ Conditioned medium,CM）与其间接共培养 24小时，分组（0μL组、400μL组、800μL组、1200μL组、1600μL组），Western Blot检测各组中 THP-1表达的 SHP2，探究间接共培养对 THP-1的 SHP2表达的影响。 2.选出 SHP2高表达的条件培养培基剂量，用于与 PMA处理后的 THP-1进行间接共培养，分组为 M0组、TAMs组， Western Blot检测 THP-1表达的 CD163、CD206，探究间接共培养对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响。 3.SHP2 抑制剂（PHPS1 sodium salt，PHPS1）预处理PMA 刺激后的THP-1细胞,再与肺癌细胞间接共培养，分组为M0 组、TAMs组、PHPS1（ 10μM）组、PHPS1（ 20μM）组、PHPS1（ 40μM）组， Western Blot检测各组中 THP-1的 SHP2、p-SHP2、CD163、CD206表达量，探讨 SHP2 是否参与细胞肺癌中肿瘤相关巨噬细胞的极化。 研究结果： 1.人外周血单核细胞系THP-1与肺癌细胞间接共培养后SHP2表达增加。 2.间接共培养促进人外周血单核细胞系 THP-1 向 M2 型肿瘤相关巨噬细胞极化。 3.抑制SHP2可抑制人外周血单核细胞系THP-1向M2型肿瘤相关巨噬细胞极化。 研究结论： 1.肺癌细胞与人外周血单核细胞系 THP-1间接共培养后促进THP-1向 M2型肿瘤相关巨噬细胞极化。 2.SHP2参与促进肺癌中 M2型肿瘤相关巨噬细胞的极化。
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