摘要
为开发对虾肠源益生菌，本文在从对虾肠道分离筛选具有拮抗病原弧菌活性的产芽孢菌和酵母菌基础上，分别研究了2株芽孢杆菌（Bacillus）和3株红酵母菌对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）生长性能、养殖水体和肠道菌群等影响，并进一步研究了1株芽孢杆菌和1株红酵母菌在组合使用下的养殖效果。本文为对虾养殖用益生菌种质资源开发和应用提供了基础和参考，主要研究内容与结果如下： 1. 从对虾肠道中分离筛选出拮抗弧菌效果明显的2株芽孢杆菌（编号LJ和X42）和3株海洋红酵母菌（编号为BJ、YA和YB）。其中，LJ和X42对副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）和哈维氏弧菌（V. harveyi）均具拮抗作用；3株红酵母菌均可拮抗副溶血弧菌、哈维氏弧菌和坎氏弧菌（V. campbellii），其中YA拮抗效果最明显。结合形态、生化特征和16S rRNA或5.8S-ITS基因测序分析，LJ和X42分别被鉴定为枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和花津浦芽孢杆菌（B. hwajinpoensis）；YA和BJ均被鉴定为胶红酵母菌（Rhodotorula mucilaginosa）， YB为奥默柯达酵母（Kodamaea ohmeri）。药敏和溶血试验显示芽孢杆菌LJ和X42对绝大多数抗生素表现敏感且无溶血性。 2. 为评价芽孢杆菌LJ和X42对凡纳滨对虾的益生效果，养殖实验设枯草芽孢杆菌LJ组、花津浦芽孢杆菌X42组和不加菌的对照（CK）组，每组3个1000 L重复桶，每桶100尾幼虾，每隔3 d以拌料方式向水体投入含量为1 × 105 CFU/mL的LJ和X42。养殖8周后，LJ和X42组对虾成活率和特定生长率显著上升，副溶血弧菌感染后的死亡率较对照组均显著下降（P＜0.05）。与对照组相比，LJ和X42组对虾肝胰腺和肠道脂肪酶活性，以及LJ组肝胰腺和肠道α-淀粉酶活性均显著提高；LJ组肝胰腺多酚氧化酶、超氧化物歧化酶和血清多酚氧化酶活性显著高于对照组，丙二醛含量显著降低；X42组肝胰腺溶菌酶活性和丙二醛含量分别较对照组显著上升和下降。水体菌群测序分析发现，LJ和X42组水体鲁杰氏菌属（Ruegeria）和X42组假交替单胞菌属（Pseudoalteromonas）相对丰度较对照组显著提高。肠道菌群分析发现，LJ和X42组对虾肠道红杆菌科及其下的鲁杰氏菌属相对丰度显著提高。这表明添加芽孢杆菌LJ或X42可有效提高凡纳滨对虾生长性能、消化和免疫功能，并改善水体和虾肠菌群结构。 3. 为评价三株酵母菌对凡纳滨对虾的益生效果，养殖实验设BJ、YA、YB处理组和不加菌的对照（CK）组，每组4个1000 L重复桶，每桶800尾虾苗，每隔3 d向BJ、YA和YB处理组养殖水体中分别投入浓度为1×104 CFU/mL的红酵母BJ、YA和YB细胞。养殖4周后，添加红酵母的三组对虾成活率和抗弧菌感染力较对照组均显著提高（P＜0.05）。与对照组相比，添加3株红酵母菌均显著提高了对虾肝胰腺α-淀粉酶活性，同时YA组对虾肝胰腺和肠道胰蛋白酶和肠道脂肪酶活性、BJ组肝胰腺脂肪酶和肠道胰蛋白酶活性、YB组肠道脂肪酶活性均显著提高。免疫酶方面，添加3种酵母菌均提高或显著提高了对虾肝胰腺多酚氧化酶和溶菌酶活性。菌群分析发现，与对照组相比，YA和YB组养殖水体和BJ组肠道弧菌相对丰度均显著下降。这表明3株红酵母对凡纳滨对虾成活、消化免疫和抗病等方面均具有促进作用，其中菌株YA总体表现最佳。 4. 为评价花津浦芽孢杆菌X42和胶红酵母菌YA组合使用对凡纳滨对虾作用效果，养殖实验设处理组X42（只加X42）、YA（只加YA）、XY（同时加X42和YA的复合组）和不加菌的对照（CK）组。每组4个重复桶，每桶100尾幼虾，每隔3 d以拌料方式向X42和YA组水体分别投入1×105 CFU/mL的芽孢杆菌X42和1×104 CFU/mL胶红酵母YA，向XY组水体同时投入1×105 CFU/mL的X42和1×104 CFU/mL的YA。养殖4周后，与对照组相比，XY组对虾增重率、特定生长率和抗副溶血弧菌感染能力均显著提高（P＜0.05）；XY组对虾肝胰腺和肠道中α-淀粉酶和脂肪酶活性，以及肝胰腺溶菌酶、血清酸性磷酸酶和过氧化物酶活性显著提高。XY组对虾增重率和特定生长率均优于X42组，且免疫抗病力优于X42组及YA组。这表明，花津浦芽孢杆菌X42和胶红酵母YA组合使用有助于提升凡纳滨对虾的养殖效果。
NETL