摘要
目的: 迄今为止，诊断膀胱癌的金标准是膀胱镜检查和活检。目前，尚无可靠的无创诊断标志物用于诊断膀胱癌和病理分型。本研究运用凝集素芯片技术，检测非肌层浸润性膀胱癌患者（non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC)、肌 层 浸 润 性 膀 胱 癌 患 者（ muscle-invasive bladder cancer,MIBC)和健康成年人的尿液糖蛋白糖链的差异，寻找与膀胱癌发生发展有关的糖蛋白标志物，从而作为膀胱癌诊断的一个新的标志物。 方法：（1）构建凝集素芯片，NMIBC患者术前术后、MIBC患者术前术后以及健康人这五组尿蛋白样本与凝集素芯片共同孵育，然后扫描测荧光强度。（2）分析凝集素芯片结果，选择 NMIBC患者术前术后荧光强度差异最大的 3种凝集素，用它们来富集糖蛋白，然后用 SDS-PAGE凝胶电泳、考马斯亮蓝染色及 WB实验验证差异表达的糖蛋白。质谱分析筛选出一种高丰度、高权重系数的糖蛋白。（3）SELEX实验筛选出能与目的蛋白特异性结合且结合力最高的三组适配子，适配子夹心法构建最优适配子，利用 ELONA夹心法检测该靶标蛋白在五组样本中的表达量。 结果：（1）凝集素芯片扫描后发现，与 NMIBC术后相比，NMIBC术前组中LTL、WFA、AAL、PHA-E+L这四种凝集素识别的糖链表达量明显升高。MIBC术前与术后对比发现，ConA、PSA、Jacalin这三种凝集素识别的糖链表达量明显升高。分别将NMIBC术前、MIBC术前与健康人对比，DSA、ACA、PWM、PHA-E+L、LTL等多种凝集素识别的糖链的表达量存在显著差异。（ 2 ）选择 LTL、WFA、AAL这三种凝集素富集糖蛋白，考马斯亮蓝染色发现 LTL、WFA这两种凝集素主要富集分子量略低于35kD的糖蛋白，而AAL主要富集分子量低于15kD的糖蛋白。WB实验也发现三条明显的蛋白条带。质谱分析筛选出高丰度、高权重系数的钙网蛋白(CRT)。（3）SELEX技术筛选出与靶蛋白结合力最高的三组适配子， ELONA夹心法检测该蛋白的表达量，显示与凝集素芯片的筛选结果一致。 结论：(1)五组样本中存在差异表达的糖蛋白糖链，且该蛋白为钙网蛋白。（2）钙网蛋白有作为膀胱癌诊断和/或判断预后标志物的潜力。（3）以钙网蛋白筛选的适配子能够作为尿液检测的有力工具，具有良好的应用前景。
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