摘要
目的 本课题组前期在一个 X 连锁隐性遗传视网膜色素变性（X-linked retinitis pigmentosa，XLRP）家系中发现了新的突变基因VSIG4（NM_001257403），第八个外显子区域突变（c.1013G＞A，p.C338Y）。已有研究证实，VSIG4特异性表达于组织巨噬细胞表面。本研究目的是为了研究VSIG4对视网膜小胶质细胞功能的影响。 方法 利用免疫荧光检测 VSIG4 在视网膜中的定位。给小胶质细胞转染野生型、突变型 VSIG4 基因和空载病毒（Len-WT、Len-Mut 和 Len-Cont），并通过脂多糖（LPS）刺激小胶质细胞模拟炎症状态。qRT-PCR检测炎症因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平；Western blot分析Nrf2、HO-1、GPX4、P65、PP65、NLRP3、Caspase1、GSDMD和IL-1β的蛋白表达水平；吞噬实验评估细胞吞噬功能；划痕和Transwell实验检测细胞迁移能力；CCK-8实验测试细胞活力。将LPS刺激状态下的HMC3细胞与661w 细胞（感光细胞）共培养，Western blot 分析 661w 细胞 Bax 和 Bcl2 的蛋白表达水平，PI+Hoechst染色法检测661w细胞的凋亡数量。 结果 VSIG4 定位于人和小鼠视网膜小胶质细胞。小胶质细胞在 LPS 刺激下，与Len-WT 组相比，Len-Cont 和Len-Mut 组 IL-1β、TNF-α的 mRNA 表达水平显著升高（P＜0.05）；Len-Cont和Len-Mut组Nrf2、HO-1、GPX4的蛋白表达水平显著降低（P＜0.05），NLRP3、Caspase1、GSDMD 和 IL-1β 的蛋白表达水平显著升高（P＜0.05），PP65与P65蛋白表达水平之比显著升高（P＜0.05）；Len-Cont和Len-Mut 组细胞吞噬荧光微球数量显著减少（P＜0.05）；Len-Cont 和Len-Mut 组划痕面积更大（P＜0.05），穿透Transwell小室膜的细胞数更少（P＜0.05）；Len-Cont和Len-Mut组细胞活力显著降低（P＜0.05）。在HMC3细胞与661w细胞共培养系统中，与Len-Cont和Len-Mut组HMC3细胞共培养的661w细胞Bax与Bcl2蛋白表达水平之比高于Len-WT组（P＜0.05），且细胞凋亡数量也更多。 结论 VSIG4 定位于人和小鼠视网膜小胶质细胞。当 VSIG4 基因突变后，LPS刺激状态下的小胶质细胞Nrf2/HO-1信号通路被抑制，NF-κB信号通路激活，炎症因子增多，NLRP3炎症小体活化增加，细胞焦亡加重；小胶质细胞吞噬和迁移能力减弱；细胞活力降低；共培养系统中661w细胞凋亡增加。本研究为基因治疗RP提供新的思路。
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