摘要
猪葡萄球菌引起的渗出性皮炎(exudative epidermit,EE)是一种高度接触性传染病，该疾病 已严重限制养猪业的发展。DLP4是分离自黑水虻幼虫(Hermetia illucens)免疫血淋巴的阳离子 抗菌肽，对革兰氏阳性菌具有高效抗菌活性，且安全无毒，不易产生耐药性。目前，尚未有关于 DLP4对猪葡萄球菌抗菌特性及抗菌机理等相关研究报道，基于此，本文对临床分离的两株猪葡 萄球菌进行毒素基因鉴定和靶动物致病性鉴定，并进行了 DLP4对猪葡萄球菌体外抗菌表征、体 外抗菌机理以及体内抑菌效果的相关研究，以期对DLP4对靶动物抑菌效果的评价奠定基础。 对两株临床分离猪葡萄球菌致病性研究结果显示:临床分离猪葡萄球菌R15095和437-2均 为多耐药菌株，毒素基因鉴定结果显示猪葡萄球菌R15095不携带毒素基因，猪葡萄球菌437-2 携带ExhD毒素基因，靶动物致病性试验结果显示猪葡萄球菌437-2具强致病性，能在12日龄仔 猪成功复制渗出性皮炎，且1×109CFU/mL(1mL)攻菌剂量为最小致病剂量，猪葡萄球菌437-2 引起的渗出性皮炎可使仔猪脏器出现组织病理学病变，破坏皮肤组织结构，使棘皮层出现分层。 DLP4对猪葡萄球菌的体外抗菌活性研究表明:DLP4对多耐药性猪葡萄球菌分离株R15095 和437-2具有高效抑菌活性，其MIC均低于1μM;杀菌动力学曲线显示:DLP4对猪葡萄球菌具 高效抗菌活性且具浓度依赖性;DLP4与常用抗生素对菌株R15095和437-2的联合杀菌结果显示: DLP4与头孢曲松钠、阿莫西林、青霉素和氧氟沙星均表现为协同或相加作用(FICI:0.3125-0.625); 耐药性诱导试验表明DLP4较稳定不易诱导出耐药性。 DLP4对猪葡萄球菌的体外抗菌机理研究表明:DLP4可作用于细菌细胞膜，使猪葡萄球菌细 胞皱缩，细胞发生破裂，释放内容物引起菌株死亡;同时凝胶阻滞和圆二色谱显示DLP4还可与 猪葡萄球菌基因组DNA结合，改变DNA构象，导致DNA分子碱基堆积力下降及双螺旋解旋。 DLP4对猪葡萄球菌R15095和437-2引起的小鼠腹膜炎的体内治疗效果表明:DLP4可有效 降低猪葡萄球菌R15095腹膜炎小鼠脏器荷菌量，平衡炎症因子的释放，缓解肝脏、肾脏和脾脏 炎症从而有效抵抗猪葡萄球菌感染;对猪葡萄球菌437-2引起的小鼠脓肿模型的体内治疗中， DLP4可有效减少脓肿范围，降低皮肤荷菌量，缓解皮肤炎症，减弱角质层过度角质化，促进皮 肤愈合。 本研究通过对DLP4的体外、体内抗菌特性，体外抗菌机理进行研究，表明DLP4可高效杀 灭猪葡萄球菌，对猪葡萄球菌表现出多重抗菌机制，可有效保护小鼠免受猪葡萄球菌的攻击，表 现出良好的体内抑菌效果。上述研究结果表明，DLP4具有开发为替代传统抗生素治疗猪葡萄球 菌引起的渗出性皮炎的潜力。
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