摘要
背景:炎症是机体对抗有害异物、细菌和病毒等生物的关键防御机制， 但过度的炎症反应会加剧病理过程并导致组织损伤。当肺受到外界致病因 素影响时，肺内巨噬细胞被激活后产生并释放大量炎症因子从而造成一系 列炎症反应，所以肺泡巨噬细胞的过度活化被认为是急性肺损伤的始发因 素。由于二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase-4,DPP-4)在肺上皮、血管内 皮以及肺泡巨噬细胞表面高度表达。近来研究发现DPP-4在肺部炎症免疫 应答过程中发挥着重要的作用，并参与了巨噬细胞的炎症反应调节。但对 于DPP-4是如何通过调控巨噬细胞功能来影响炎症进程的这一机制仍未阐 明。我们以DPP-4为中心来研究巨噬细胞表型转换和炎症反应的调节过程， 从而为肺泡巨噬细胞参与的急性肺损伤和肺部炎症疾病的临床治疗策略提 供有价值的思路和办法。 目的:探讨二肽基肽酶-4和JNK/AP-1信号通路在巨噬细胞极化中的 关系和作用机制。 方法:①体外培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,选取第4-6代用于本次 实验。②采用DPP-4的小干扰RNA(siRNA)进行基因沉默，用脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)诱导MH-S细胞36h构建小鼠肺泡巨噬细胞炎 症模型，MH-S细胞分组为:对照(Control)组(转染Control siRNA处理)、 DPP-4 siRNA 组(转染 DPP-4 siRNA 处理)、LPS 组(转染 Control siRNA+LPS 处理)、DPP-4 siRNA+LPS 组(转染 DPP-4 siRNA+LPS 处理)。 ③采用一氧化氮(nitric oxide,NO)测定试剂盒检测NO含量，免疫荧光检 测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成情况，蛋白质免疫印迹 (western blotting,WB)检测M1和M2型极化标志物白细胞分化抗原 (cluster of differentiation,CD)86、CD206 蛋白表达情况，逆转录定量聚 合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测 CD86、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、 诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、白细胞介素 (interleukin,IL)-1β、CD206、精氨酸酶-1(arginase-1，ARG-1)、IL-10、 IL-4的基因水平。④在LPS组、DPP-4 siRNA+LPS组基础上加入10 nmol/L c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白抑制剂 SP600125 刺激;MH-S 细胞分组为 LPS 组、DPP-4 siRNA+LPS 组、LPS+SP600125 组、DPP-4 siRNA+LPS+SP600125 组。⑤WB 检测 CD86、CD206 蛋白， JNK 以及激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的转录蛋白(c-Jun，c-Fos) 磷酸化水平;RT-qPCR 检测各组 TNF-α、IL-1β、ARG-1、IL-10 的 mRNA 水平。 结果:①与Control组比较，DPP-4 siRNA组NO、ROS生成含量， CD86及CD206蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);LPS组中NO、ROS 生成含量，CD86蛋白及基因(CD86,TNF-α,iNOS,IL-1β)mRNA表达升高 (P＜0.05);CD206 蛋白及基因(CD206，ARG-1，IL-10，IL-4)mRNA 表达降 低(P＜0.05)。②与LPS组相比，DPP-4 siRNA+LPS组NO、ROS生成含 量，CD86蛋白及基因(CD86,TNF-α，iNOS，IL-1β)mRNA表达显著升高 (P＜0.05);CD206 蛋白及基因(CD206,ARG-1，IL-10，IL-4)mRNA 表达显 著降低(P＜0.05)。③与 LPS 组相比，DPP-4 siRNA+LPS 组 JNK、c-Jun、 c-Fos蛋白磷酸化表达升高（P＜0.05）。与DPP-4 siRNA+LPS组相比，DPP-4 siRNA+LPS+SP600125 组 CD86 蛋白及基因（TNF-α,IL-1β）mRNA 表达， JNK、c-Jun、c-Fos蛋白磷酸化表达显著降低（P＜0.05）;CD206蛋白及基 因（ARG-1，IL-10）mRNA 表达显著升高（P＜0.05）。④与 LPS+SP600125 组比较，DPP-4 siRNA+LPS+SP600125 组 CD86、CD206、JNK、c-Jun、 c-Fos蛋白及磷酸化表达，TNF-α、IL-1β、ARG-1、IL-10基因表达差异无 统计学意义（P＞0.05）。 结论:抑制DPP-4可以促进LPS诱导的巨噬细胞释放促炎因子并产生 M1型极化，其作用机制可能和JNK/AP-1通路有关。
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