摘要
四君子散是治疗脾虚证的经典方剂，具有健脾益气之功效。瘤胃在中兽医学中属于脾胃范畴, 其发酵可为反刍动物提供70％～80％的能量。受分娩应激和泌乳启动影响，大部分奶牛尤其是高 产奶牛产后处于能量负平衡状态，极易诱发代谢性疾病和炎症性疾病的发生。据此推测，通过健 脾益气方药调整奶牛产后瘤胃功能，极有可能改善奶牛产后能量负平衡状态，降低产后代谢性和 炎症性疾病的发病率。目前，已有很多研究证实肠道微生物群与中药活性成分具有相互作用，中 药的生物活性成分能够调节肠道微生态系统的平衡，同时肠道微生物群通过生物转化将中药成分 分解为具有高生物活性的次级代谢产物，从而提高它们的生物利用度。基于此，本试验研究了四 君子散与奶牛瘤胃菌群的相互作用，以期为该药在奶牛产后保健中应用提供理论支撑。研究内容 与结果如下: 1.四君子散对奶牛瘤胃发酵参数的影响 采集健康荷斯坦奶牛的瘤胃液，分为对照组和5个试验组。对照组不加四君子散，试验组分 别加入100、200、300、400、500 mg四君子散。每组5个重复，进行体外发酵试验，记录不同 发酵时间点产气量，并测定发酵48 h后瘤胃液pH、NH3-N、MCP和VFA的含量。研究结果显 示:随着发酵时间延长，各组产气量均呈上升趋势，在同一发酵时间点，不同剂量四君子散组产 气量均明显高于对照组（P＜0.05）,各剂量组之间呈现较好的剂量依赖关系;发酵48h后，200、 300、400、500 mg四君子散组瘤胃液pH值极显著低于对照组（P＜0.01），各剂量组之间也呈较 好的剂量依赖关系;对瘤胃NH3-N的影响并未呈现良好的剂量依赖关系，但500 mg四君子散组 瘤胃NH3-N浓度较对照组极显著降低（P＜0.01）;200、300、400和500 mg四君子散组瘤胃MCP 浓度显著高于对照组（P＜0.05）,且100～400 mg四君子散组呈较好的剂量依赖关系;各剂量四 君子散组总挥发性脂肪酸与乙酸浓度均显著高于对照组，且各剂量组之间差异显著（P＜0.05）， 呈良好的剂量依赖关系，200、300、400和500mg四君子散组丙酸、正丁酸浓度极显著高于对照 组（P＜0.01）。结果表明四君子散能显著促进瘤胃微生物发酵能力。 2.四君子散对奶牛瘤胃菌群的影响 采用16SrRNA高通量测序技术研究了 400 mg四君子散对奶牛瘤胃菌群结构的影响。对 照组与四君子散组在门水平上的优势菌门均为Bacteroidota和Firmicutes,在属水平上的优势菌 群均为 F082、Prevotella、Rikenellaceae-Rc9-gut-group。 Alpha和Beta多样性分析显示，四君子散显著改变了瘤胃菌群组成结构（P＜0.05）;显著降 低了 F082 菌、Comamonas、Oscillospiraceae_UCG-005、Muribaculaceae、Christensenellaceae_R- 7_group菌属相对丰度（P＜0.05，P＜0.01）;显著升高了 Succiniclasticum和Prevotella相对丰度 （P＜0.01）。 相关性分析表明，Prevotella、Succiniclasticum于乙酸、丙酸、正丁酸均呈极显著正相关（P ＜0.01）;Muribaculaceae、Comamonas 与乙酸、丙酸、正丁酸均呈显著负相关（P＜0.05）;F08 2、UCG_005 与乙酸、丙酸、正丁酸呈极显著负相关（P＜0.01）;Christensenellaceae_R-7_group 与正丁酸呈显著负相关（P＜0.05）,与乙酸和丙酸呈极显著负相关（P＜0.01）。 3.奶牛瘤胃菌群结构对四君子散主要药效成分的影响 利用广靶代谢组学技术研究了奶牛瘤胃菌群结构对四君子散主要药效成分的影响，结果表明 瘤胃菌群显著降低了甘草查尔酮B、毛蕊异黄酮、美迪紫檀素、甘草素C、甘草苷和甘草酸含量 (P＜0.01);显著升高了茯苓酸和茯苓酸A含量(P＜0.01)。相关性分析表明，茯苓酸与 Christensenellaceae_R-7_group呈显著正相关(P＜0.05);茯苓酸A与Prevotella呈显著正相关 (P＜0.05);美迪紫檀素与Succiniclasticum呈极显著性负相关(P＜0.01)，与F082菌呈显著性 正相关(P＜0.05)。 结论:四君子散能显著促进瘤胃微生物发酵能力，增加瘤胃菌群多样性和挥发性脂肪酸的含 量，除茯苓酸和茯苓酸A含量上升外，其它主要活性成分在瘤胃菌群作用下显著降低，表明四君 子散是促进瘤胃发酵的物质基础。
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