摘要
目的: 骨巨细胞瘤（GiantCellTumorofBone,GCTB）是一种中间型/恶性潜能未定的原发性骨肿瘤，具有较强的局部侵袭性。据最新研究显示，中国原发性骨肿瘤中骨巨细胞瘤的发病率约13.7%~17.3%，西方国家约3%~5%[1]。骨巨细胞瘤的不良预后有很多不确定性，目前没有一个广泛接受的骨巨细胞瘤病理组织学分级系统。近年来，研究发现H3F3A的基因突变与多种肿瘤的发生发展有关，但H3F3A不同突变位点与骨巨细胞瘤的病理组织学形态及临床预后的关系尚不明确。 本研究评估了山西医科大学第二临床医院96例骨巨细胞瘤的病理组织学形态观察，应用组织芯片、免疫组化检测骨巨细胞瘤特定标志物的表达，并用Sanger测序检测H3F3A基因的突变位点，分析骨巨细胞瘤临床病理特征与H3F3A分子检测的关系。 1、通过96例骨巨细胞瘤临床病理分析，进一步明确骨巨细胞瘤复发相关的临床病理因素。 2、通过检测96例H3F3A基因突变及相关临床病理分析，明确H3F3A基因检测的意义及不同突变位点与患者临床病理特征间的关系，旨在为H3F3A基因在患者预后预测的潜在应用价值提供理论依据。 方法： 1、96例骨巨细胞瘤的临床病理分析 （1）研究对象：对山西医科大学第二临床医院2019年1月至2023年12月期间经病理明确诊断为骨巨细胞瘤病例96例进行临床病理特征的回顾性分析。 （2）临床资料：收集患者的一般信息（性别、年龄、患病部位、肿物最大径、地诺单抗治疗与否、手术方式），术后随访资料（是否复发）及影像学资料。根据肿瘤的边界清晰度和骨质受损的程度，利用Campanacci分级系统将肿瘤划分为三个不同的等级。 （3）病理组织形态学观察：2名病理医师独立评估每例骨巨细胞瘤中多核巨细胞及单核基质细胞的比例，是否存在脉管内瘤栓、梭形细胞变、肿瘤坏死、成骨现象、是否继发动脉瘤样骨囊肿及周围软组织侵犯等特征。将96例样本进行H3F3A、H3F3B、P53、P63、KI-67免疫组化染色（其中包含43例组织芯片）。 （4）临床病理相关性分析：观察并分析临床及病理特征在是否复发组间的差异。 （5）统计学方法：本部分研究中，使用SPSS23.0软件进行统计。定量资料采用均数±标准差进行统计描述，采用两独立样本t检验分析进行比较。定性资料统计描述采用率表示，采用R×C卡方检验进行比较。P＜0.05表示差异具有统计学意义。 2、骨巨细胞瘤H3F3A基因检测及临床病理相关性分析 （1）研究对象：山西医科大学第二临床医院2019年1月至2023年12月期间，明确诊断为骨巨细胞瘤的病例共96例，收集其临床特征（如性别、年龄、影像学部位）、手术治疗方法（包括病灶刮除和瘤段切除）、影像学Campanacci分级以及随访结果等关键信息。 （2）临床资料：收集患者的一般信息（性别、年龄、患病部位、肿物最大径、地诺单抗治疗与否、手术方式），术后随访资料（是否复发）及影像学资料。根据肿瘤的边界清晰度和骨质受损的程度，利用影像学Campanacci分级系统将肿瘤划分为三个不同的等级。 （3）毛细管电泳联合Sanger测序进行H3F3A基因检测：本研究中，我们检测了96例骨巨细胞瘤组织样本中H3F3A基因的突变情况，根据H3F3A基因检测结果进行分组： 1）根据H3F3A是否突变，分为突变组与未突变组； 2）根据不同突变位点分为G34W突变组、罕见突变组（含G34L、G34V及Y41H）。 （4）病理组织形态学观察：2名病理医师独立评估每例骨巨细胞瘤中多核巨细胞及单核基质细胞的比例，是否存在脉管内瘤栓、梭形细胞变、肿瘤坏死、成骨现象、是否继发动脉瘤样骨囊肿及周围软组织侵犯等特征。将96例样本进行H3F3A、H3F3B、P53、P63、KI-67免疫组化染色（其中包含43例组织芯片）。 （5）临床病理相关性：分析H3F3A基因是否突变及不同突变组间临床及病理特征的差异。 （6）统计学方法：本部分研究中，使用SPSS23.0软件进行统计。定量资料采用均数±标准差进行统计描述，采用两独立样本t检验及秩和检验分析进行比较。定性资料统计描述采用率表示，采用R×C卡方检验进行比较。P＜0.05表示差异具有统计学意义。一致性采用Kappa一致性进行分析。 结果： 1、96例骨巨细胞瘤的临床病理分析 （1）骨巨细胞瘤复发相关的临床特征： 1）一般特征：山西医科大学第二临床医院2019年1月至2023年12月，共96例经病理学确诊骨巨细胞瘤病例，术后随访，其中复发病例15例（15.62%），非复发病例共81例（84.38%）。 2）根据骨巨细胞瘤是否复发分成骨巨细胞瘤复发组及非复发组两组,比较两组间的临床特征的差异性，结果显示对于性别,年龄,部位,地诺单抗治疗,最大径共5项不会表现出显著性差异；而对于采用不同的手术方式、影像学Campanacci分级在组间差异具有统计学意义（p＜0.05)；同时我们也发现骨巨细胞虽然女性发病率较高，而男性的复发率较女性高。 （2）骨巨细胞瘤复发相关的病理特征： 病理组织学形态中肿瘤侵犯周围软组织,免疫组织化学P53,P63的表达共3项在复发及非复发组间差异具有统计学意义（p＜0.05）。肿瘤复发与否与反应性成骨、梭形细胞变、肿瘤性坏死、核分裂像、继发ABC共6项病理学特征均没有统计学意义。 2、骨巨细胞瘤H3F3A基因检测意义与临床病理分析 （1）骨巨细胞瘤H3F3A基因检测结果： 1）H3F3A基因检测结果：96例骨巨细胞瘤H3F3A基因检测结果，H3F3A突变共计85例（88.54%），未见突变11例（11.46%）。 2）H3F3A基因检测不同突变位点：最多见的突变为G34W，共计76例（89.41%）；罕见突变共9例（10.59%），其中G34V突变4例（4.71%）；G34L突变2例（2.35%）；Y41H罕见突变3例（3.53%）。 3）H3F3A基因检测与IHC指标H3F3A表达的一致性： ①Kappa一致性分析结果显示H3F3A基因检测与免疫组化表达之间的一致性非常高，并且具有统计学意义。 ②H3F3A基因检测中G34W突变与免疫组化H3F3A阳性表达之间有很强的相关性，而罕见位点突变则与阴性表达相关，具有统计学意义。 （2）骨巨细胞瘤H3F3A基因检测的临床特征分析： 1）骨巨细胞瘤H3F3A基因检测是否突变的临床特征差异 ①H3F3A基因检测结果：93例骨巨细胞瘤H3F3A基因检测结果，其中H3F3A基因检测阴性共计11例（11.46%），阳性共计82例（88.17%），因罕见突变位点尚未见文献报道，所以未列入阳性病例中。 ②H3F3A基因检测突变是否突变组间对于性别，年龄，部位，影像学最大径，Campanacci分级，地诺单抗治疗,手术方式以及是否复发共8项均没有统计学差异。 2）H3F3A基因检测不同突变的临床特征差异： 手术方式及随访结果与H3F3A基因检测不同突变组间差异具有统计学意义，刮除手术的G34W突变较高。未复发患者的G34W突变显著高于复发患者。而其余临床特征在H3F3A基因检测不同突变组间差异不具有统计学意义。 （3）骨巨细胞瘤H3F3A基因检测的病理特征分析： 1）H3F3A基因检测是否突变的病理特征差异：93例骨巨细胞瘤H3F3A基因检测结果，其中H3F3A基因检测未突变共计11例（11.46%），突变共计82例（88.17%），因罕见突变位点Y41H尚未见文献报道，所以未列入阳性病例中。 H3F3A基因的是否突变与病理特征（成骨、梭形细胞变、肿瘤坏死等）之间没有统计学意义。然而，IHCP63的表达与H3F3A基因是否突变组间差异具有统计学意义。 2）H3F3A基因检测不同突变的病理特征差异： 脉管内瘤栓、核分裂像，IHCP53、P63表达在H3F3A基因检测不同突变组间差异具有统计学意义。有脉管内瘤栓、核分裂像及IHCP53阳性和P63阴性的样本中罕见位点的比例显著更高。H3F3A基因检测不同突变组间与其余的病理特征差异不具有统计学意义。 3）骨巨细胞瘤罕见突变位点的病例分析： ①临床特征：所有Y41H突变案例年龄均大于20岁。肿瘤均位于长骨，所有病例的Campanacci分级均为Ⅱ级以上。 ②病理特征：有三分之二（2/3，66.67%）的病例组织学形态中可见成骨反应和肿瘤坏死。所有病例（3/3，100%）均可见梭形细胞变化和核分裂像。此外，三分之二（2/3，66.67%）的病例中观察到脉管内瘤栓。 结论： 1、骨巨细胞瘤临床病理分析： （1）疾病复发与影像学Campanacci分级（Ⅱ级及以上）以及瘤段切除手术方式密切相关。 （2）疾病复发与病理形态中周围软组织侵犯、IHCP63阴性以及P53阳性表达密切相关。 2、骨巨细胞瘤H3F3A基因检测意义及临床病理分析： （1）H3F3A免疫组化检测与基因测序结果显示高度一致性。 （2）H3F3A基因不同突变在手术选择和疾病预后中的显著性差异，提示H3F3A基因检测在制定临床诊疗决策的潜在价值。 （3）脉管内瘤栓、核分裂像的有无、以及IHCP53阳性、P63阴性表达与H3F3A基因检测罕见突变密切相关。 （4）H3F3A基因罕见突变位点Y41H与肿瘤的高侵袭性及高复发率密切相关。
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