摘要
自从1997年高致病性禽流感病毒（HPAIV）感染人类以来，科学家们进行了大量的工作来阐明HPAIV跨越种间屏障感染哺乳动物的机制。但是与HPAIV的研究相比，人们对低致病性禽流感病毒（LPAIV）如何适应哺乳动物的机制却知之甚少。LPAIV作为HPAIV或大流行毒株基因片段的潜在提供者，对人类的影响很大。因此对LPAIV对哺乳动物的适应性的研究刻不容缓。 H5N1病毒在自然进化过程中形成多个进化分支（根据血凝素HA基因划分）和复杂的基因型，多个基因型的病毒都显示对哺乳动物的致病力逐渐增强的趋势。然而以A/鸡/山西/2/2006（SX/2/06,简称SX）为代表的7.2分支病毒自2006年出现以来，一直保持对哺乳动物小鼠的低致病力。本研究以BALB/c小鼠为模型，探索了该分支病毒对哺乳动物致病力增强的可能性及相关分子基础。通过在BALB/c小鼠肺脏的连续传代，获得了一株对小鼠高致病性SX/2/06变异株6MA20。基因序列测定结果表明，6MA20与母本毒株RSX相比，共有7个位点发生变化，分布于PB2、HA、NP和M2基因上，分别为PB2L201F、HAG216V、NPR348K和P419S、M2D24N、K56E和D88N。通过反向遗传学技术，本研究构建了一系列的突变病毒，通过对小鼠的致病性实验，发现PB2L201F、NPR348K和P419S、M2D88N是导致病毒毒力增高的主要原因。这些位点的突变（PB2-201+NP-348419+M2-88）显著的增加了病毒在哺乳动物上的适应性和致病力。体外生长曲线结果表明RSX-PB2-201+NP-348419+M2-88可以在多种哺乳动物细胞上生长，并且滴度较高。体内生长曲线表明，RSX-PB2-201+NP-348419+M2-88可以在小鼠的肺脏中有效的复制增殖，并且可以长时间的维持较高的病毒滴度。脏器滴定表明，RSX-PB2-201+NP-348419+M2-88可以在多个脏器中有效复制，增加了病毒的组织嗜性。聚合酶活性实验表明，PB2和NP的同时突变可以显著的增强病毒的聚合酶活性。以上研究表明，PB2、NP和M2的联合突变是导致突变病毒RSX-PB2-201+NP-348419+M2-88对小鼠致病力增强的主要因素。
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