摘要
西洋参(PanaxquinquefoliumL.),又名广东人参,花旗参,属于五加科(Araliaceae)人参属(Panax)的多年生宿根性草本植物,与中国人参(PanaxginsengL.),三七(PanaxnotoginsengL.)同属不同种,是一种名贵中草药。 本文以西洋参花药为外植体,通过诱导培养基和继代培养基筛选试验,建立西洋参花药愈伤组织无性系;通过分化培养基筛选试验,对愈伤组织再分化进行研究;通过愈伤组织资源生长情况和皂苷含量的比较试验,筛选生长稳定的高产无性系。主要研究结果如下: 1.考察不同培养基组成,不同浓度2,4-D、6-BA和蔗糖对西洋参花药愈伤组织诱导的影响。结果表明,单独添加一定浓度的2,4-D能够诱导愈伤组织的形成。2,4-D2mg/L和6-BA0.5mg/L的激素配比下,西洋参花药愈伤组织的诱导率为十个培养基中最高,达到37.53%。蔗糖浓度为60g/L时,诱导率达到最高,随着蔗糖浓度进一步提高,反而不利于花药愈伤组织的诱导。MS培养基较PⅡ培养基更适合作为西洋参花药愈伤组织培养的基本培养基。筛选出诱导西洋参花药愈伤组织的最佳培养基MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖60g/L+琼脂5.5g/L+水解乳蛋白0.5g/L。 2.考察不同浓度2,4-D、6-BA对西洋参花药愈伤组织继代的影响。结果表明,2,4-D2mg/L,6-BA浓度在0.5~2mg/L的激素配比,均能让花药愈伤组织保持良好生长。初步建立了西洋参愈伤组织无性系,保存西洋参愈伤组织资源115份。 3.考察不同激素配比对西洋参花药愈伤组织分化影响,设计11个分化培养基配方。结果表明,愈伤组织在F6、F9分化培养基中分化出共8个绿原基。西洋参花药培养分化培养试验条件有待深入研究。 4.考察20份西洋参愈伤组织资源的生长情况,以愈伤组织继代一次的鲜重增长率为指标。结果表明,在连续四次继代中,20份愈伤组织资源生长相对稳定。其中,6份增长率超过200%,5份增长率介于150~200%,7份增长率100~150%,2份增长率低于100%。 5.采用超高液相色谱法,测定20份愈伤组织资源的皂苷含量。结果表明,愈伤组织资源中总皂苷含量超过1%的有8#、9#、14#、25#、47#,共计5份。愈伤组织资源中总皂苷含量介于0.5~1%的有4#、5#、48#、69#,共计4份。其余11份愈伤组织资源皂苷含量低于0.5%。总皂苷含量最高的为25#,总皂苷含量超过3%。该含量接近西洋参中根的总皂苷含量。单体人参皂苷Rg1、Re和Rb1在20份愈伤组织资源中含量最为丰富。