摘要
第一章男性雄激素性秃发患者枕部药物应答研究 目的: 1、探究口服非那雄胺对男性雄激素性秃发（AGA）患者枕部外观及毛囊的改善情况。 2、探究口服非那雄胺对男性不同脱发类型患者，包括男性型脱发（MPHL）及女性型脱发（FPHL），枕部毛囊的改善程度。 方法: 1、收集我院2019年8月至2023年8月初诊的男性AGA患者，签署知情同意后，予口服非那雄胺1mg/天。采集初诊时患者病程、家族史、BMI、基础疾病等病史，收集患者头部前、中、后及枕部的大体照片。使用头皮微色素着色(SMP）对患者枕部头皮做标记，使用DinoLite在SMP标定点拍摄毛发镜照片。每次随访时，拍摄相同方位大体照片及标定点处毛发镜照片。 2、整理用药大于等于6个月的患者，对照Norwood-Hamilton或Sinclair分级法，采用3级评分法对比治疗前后的枕部大体照片。使用DinoCapture2.0软件分析治疗前后枕部标定点的毛发指标，包括:毛发直径、毛囊单位密度、终毛密度及毛发质量指数（HDI）,统计学方法分析不同脱发类型（包括MPHL及FPHL）患者枕部毛囊的改善程度。 结果: 1、共收集31名使用非那雄胺大于等于6月的男性AGA患者，其中22名为MPHL（71％）,9名为FPHL（29％）,平均年龄为34.9±8.3年。 2、非那雄胺那使用剂量为1mg/天，平均治疗时间为6.4个月（范围:6-12月）。后枕部大体照片评估结果显示，MPHL患者中86.4％改善，9.1％稳定，4.5％恶化，FPHL患者中66.7％改善，33.3％保持稳定，无患者恶化。 3、毛发镜下毛发参数结果显示男性的MPHL和FPHL患者后枕部毛发直径、终毛密度及HDI较治疗前显著提升，两种脱发类型的男性AGA患者之间改善程度差异无统计学意义。 结论: 1、使用非那雄胺6月或以上能够显著提高男性MPHL和FPHL患者后枕部大体外观及毛发镜毛发指标，两种脱发类型之间改善程度无统计学差异。枕部HDI的提高提示植发手术中枕部可以获得更多毛囊单位，表明男性AGA患者在毛发移植手术前应考虑使用非那雄胺。 2、正常外观的枕部头皮在使用非那雄胺疗程大于等于6个月后也出现了大体照片及毛发质量指数的改善，表明枕部头皮的雄激素变化可能在疾病早期阶段就已经存在。 第二章男性雄激素性秃发患者枕部不同头皮分区毛囊表型研究 目的: 通过毛发镜指标、苏木素-伊红（HE）染色、毛囊体外培养、免疫荧光染色等方法观察男性雄激素性秃发（AGA）患者枕部不同区域毛囊临床表型及生物学行为差异。 方法: 1、签署知情同意后，收集我院2019年8月至2023年8月于复旦大学附属华山医院静安分院行毛发移植手术的男性AGA患者，收集患者年龄、病程、家族史、用药史、BMI等病史，并测量患者枕部上下界高度。 2、将患者后枕部分为上过渡区、枕中部及下过渡区三个区，通过DinoLite毛发镜测量枕部头皮三个区内的毛发指标，包括:毛发直径、毛囊密度、终毛密度及毛发直径指数（HDI）。 3、采用毛囊单位钻取术（FUE）的方法提取患者枕部上过渡区、枕中部及下过渡区完整毛囊，分别进行HE染色、毛囊体外培养、雄激素受体（AR）免疫荧光染色，分别观察男性AGA患者枕部不同分区的毛囊毛乳头直径、体外毛囊生长周期及AR表达差异。 结果: 1、共收集37名植发前男性AGA患者，平均年龄为31.4±7.5岁，平均病程为6.2±3.8年。 2、DinoLite毛发镜下男性AGA患者枕中部毛发直径及HDI显著高于上、下过渡区，毛囊单位密度及终毛密度差异无统计学意义。spearman相关性分析结果显示，枕中部毛发直径与年龄呈负相关（P=0.018,相关系数=-0.388）。 3、HE染色提示枕中部毛囊的毛乳头直径显著高于下过渡区，有大于上过渡区趋势;毛囊体外培养结果显示枕中部毛囊在体外较上、下过渡区毛囊生长期更长。免疫荧光染色结果显示枕中部较上、下过渡区低表达AR。 结论: 1、与枕中部相比，男性AGA患者上、下过渡区的毛囊在临床表型上存在微小化，同时男性AGA患者枕中部毛发直径与年龄呈负相关，提示即使是枕中部毛囊也可能存在与年龄相关的微小化。 2、与枕中部相比，男性AGA患者上、下过渡区毛囊在体外培养的生长期短于枕中部，同时枕上、下过渡区毛囊较枕中部高表达AR。提示枕部上、下过渡区毛囊可能存在雄激素相关的微小化。 第三章男性雄激素性秃发患者枕部不同头皮分区毛囊转录组学研究 目的: 1、通过转录组学探究枕部上、下过渡区与枕中部毛囊差异表达的基因。 2、通过免疫荧光染色及毛囊体外培养的方法初步对目标基因进行验证。 方法: 1、从24例男性雄激素性秃发（AGA）患者的枕部上过渡区、枕中部及下过渡区采用毛囊单位钻取术（FUE）的方法提取5个毛囊单位，抽提毛囊RNA进行RNA-seq转录组学研究。分别比较患者枕部上过渡区、下过渡区与枕中部差异表达的基因，并进行GO通路富集、KEGG通路富集、PPI分析，筛选出关键的差异基因。 2、采用免疫荧光染色的方法对枕部不同区域的毛囊染色，验证目标基因在枕部的差异表达。 3、使用目标基因的抑制剂对毛囊进行体外培养，观察抑制目标基因后体外毛囊生长周期变化。 结果: 1、男性AGA患者枕部上过渡区与枕中部相比，上调基因135个，下调基因83个，GO通路富集主要富集在DNA转录激活相关通路、角蛋白及角蛋白关联蛋白（KAPs）通路，KEGG通路富集主要富集在IL-17及一些炎症通路。通过PPI分析，富集到前10位基因主要是角蛋白、KAPs及激活蛋白-1（AP-1）相关蛋白。 2、男性AGA患者枕部下过渡区与枕中部相比，上调基因179个，下调基因132个。GO通路富集主要富集在DNA转录激活相关通路以及免疫应答通路。KEGG通路富集主要富集在IL-17及一些炎症通路。PPI富集到前10位基因主要是AP-1相关蛋白及下游炎症因子。 3、RNA-seq数据显示下过渡区AP-1及下游炎症因子显著高于枕中部及上过渡区。毛囊免疫荧光染色可见下过渡区C-JUN表达量高于枕中部及上过渡区，下过渡区C-FOS显著高于枕中部，有高于上过渡区趋势。毛囊体外培养，AP-1抑制剂（T-5224）组与对照组相比毛囊生长期延长。 结论: 1、男性AGA患者枕部上过渡区及下过渡区分别存在与枕中部差异表达的基因，GO富集分析主要富集在DNA转录激活相关通路及角蛋白相关通路，而KEGG富集分析主要富集在IL-17及一些炎症通路，其中关联性最强的差异基因是AP-1相关基因。 2、下过渡区AP-1及下游炎症因子的表达显著高于上过渡区及枕中部，同时使用AP-1抑制剂后毛囊生长期延长，提示AP-1相关炎症可能是导致枕部毛囊微小化表型的原因之一，可尝试作为炎症性毛囊微小化治疗的靶点。 3、角蛋白及KAPs基因在枕部上过渡区、枕中部、下过渡区的表达存在明显差异。KAPs在枕中部高表达，这与枕中部毛囊质量的结果最佳一致。
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