摘要
目的探究仙茅苷（Curculigoside，CCG）在牙周炎治疗中的意义及机制，为牙周炎的治疗提供新的理论依据和研究方向。 方法1、从收集的正畸减数牙中分离培养人牙周膜干细胞（Periodontalligamentstemcells，PDLSCs）。使用CCK-8检测法，选择CCG刺激的最适宜浓度。使用脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激PDLSCs建立细胞炎症模型。测定不同时间LPS（1μg/mL）刺激下PDLSCs中炎症因子的表达水平，确定LPS最佳作用时间。 2、蛋白质印迹实验（WesternBlot，WB）实验、实时荧光定量PCR（quantitativeReversetranscriptionpolymerasechainreaction，qRT-PCR）检测空白对照组、LPS组、LPS+CCG治疗组炎症因子表达情况，以探究CCG对于炎症的影响。 3、成骨诱导液对空白对照组、LPS组、LPS+CCG组细胞进行诱导，通过茜素红染色（Alizarinredstaining，ARS）、碱性磷酸酶染色（Alkalinephosphatasestaining，ALP）、qRT-PCR、WB检测不同分组成骨相关标志物的表达情况，探索不同分组细胞成骨分化的情况。 4、免疫荧光技术检测不同分组中核因子κB亚基p65（Nuclearfactorkappa-Bp65，p65）的表达位置，WB检测细胞核内p65及抑制蛋白κB（InhibitionproteinκB，IκB）的表达水平，从而探讨核因子κB（Nuclearfactorkappa-B，NF-κB）信号通路在这一过程中的作用。 5、通过带菌丝线结扎法建立SpragueDawley大鼠牙周炎模型，将其分为正常对照组、牙周炎组、牙周炎+CCG治疗组、牙周炎+NaCl治疗组。在给药治疗后，局麻下收集大鼠上颌骨组织并固定。通过苏木素-伊红染色（Hematoxylin-eosinstaining，HE）及抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistantacidphosphatase，Trap）染色观察各组牙周组织的染色情况；免疫组织化学检测牙槽骨中炎症分子及成骨标志物的表达水平。 6、通过微型计算机断层扫描（Microcomputedtomography，Micro-CT）观察各组大鼠牙槽骨的骨小梁改变及其骨吸收情况。 结果1、CCG作用浓度为5μM，LPS刺激细胞建立炎症模型时间为6小时。 2、LPS+CCG组炎症因子肿瘤坏死因子α（Tumornecrosisfactorα，TNF-α）和白细胞介素6（Interleukin-6，IL-6）的表达水平较LPS组下降。 3、成骨诱导处理后，LPS+CCG组的ALP染色及ARS染色程度较LPS组加深；成骨标志分子Runt相关转录因子2（Recombinantruntrelatedtranscriptionfactor2，RUNX2）、骨形态发生蛋白2（Bonemorphogeneticprotein2，BMP2）的表达水平较LPS组升高。 4、免疫荧光显示CCG治疗逆转了LPS刺激下的p65核转移，而且LPS+CCG组细胞核内的p65及IκB的表达水平较LPS组降低。 5、大鼠牙周炎模型中，牙周炎组及牙周炎+NaCl治疗组的HE及Trap染色可以观察到明显炎症细胞浸润及破骨细胞数量的增加，牙周炎+CCG治疗组炎症程度明显减轻。免疫组化结果表明，治疗组的炎症分子IL-6表达较牙周炎组降低，同时其成骨标志分子BMP2表达较牙周炎组明显升高。 6、Micro-CT三维重建及数据分析可以观察到牙周炎+CCG治疗组骨吸收程度减轻，而牙周炎+NaCl治疗组与牙周炎组无明显差异。 结论CCG通过NF-κB信号通路降低牙周炎环境下炎症因子的表达水平、抑制骨吸收。上述研究结果，为CCG在牙周炎治疗中的应用提供了理论支持，并为临床治疗牙周炎提供了新的思路。
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