摘要
家蚕人工饲料育是一项重大技术变革，是传统蚕业向现代蚕业发展的关键革新技术，有助于家蚕产业走向规模化、产业化、集约化。近年来我国科研人员对家蚕人工饲料进行了广泛研究和应用开发，但仍然存在饲料成本高、家蚕发病率高、茧层率低等问题，导致人工饲料育蚕未能广泛推广应用。本研究以菁松×皓月杂交种家蚕为研究对象，探究不同成分及含量的饲料对家蚕生长和茧质的影响，开发出一种较低成本的全龄家蚕人工饲料配方，通过对三龄家蚕中肠细菌的分离，筛选到两株产酶能力优良的功能菌株，同时测试了短乳杆菌CSHRR5-3对家蚕生长发育的益生效果。其相关研究分述如下： 1.采用桑叶粉含量为25%、30%的两种饲料饲喂家蚕，测试家蚕的体重、消化率、茧质三个指标，结果表明30%的桑叶粉含量较为适宜；豆粕粉作为大豆蛋白，家蚕的眠起率、存活率高于黄豆粉，且成本低于黄豆粉。测试饲料pH值分别为4.7、5.1、5.5对家蚕生长的影响，结果表明pH值为5.1时，更有利于家蚕眠起、生长和存活，同时不影响饲料的防腐性能。结合前人的研究成果，开发出适合菁松×皓月杂交种家蚕的全龄人工饲料，配方为桑叶粉30%、豆粕粉25%~31%、玉米粉28%~32%、无机盐混合物2.3%~2.5%、VB混合物1.7%~2%、VC1%、山梨酸钾0.6%、柠檬酸3%、功能物质3.6%~5.4%、pH值5.1，该饲料在小蚕起蚕率和存活率以及家蚕茧质方面有着促进作用。 2.通过常规稀释涂布平板法和基于复苏促进因子Rpf的VBNC菌株分离法分离家蚕中肠细菌，共分离获得103株细菌，归属于4个门、5个纲、10个目、13个科、16个属，其中常规稀释涂布平板法分离获得28个菌株，优势菌群为变形菌门（Proteobacteria）肠杆菌属（Enterobacter）；添加活性Rpf的实验组获得48株VBNC菌，优势菌群为厚壁菌门（Firmicutes）芽孢杆菌属（Bacillus）；添加灭活Rpf的对照组获得27株可培养细菌，优势菌门为变形菌门（Proteobacteria），优势菌属为芽孢杆菌属（Bacillus）、肠杆菌属（Enterobacter）和假单胞菌属（Pseudomonas）。VBNC菌株的检出为发掘家蚕肠道的菌种资源和开发功能菌提供了一种新的思路。 3.对分离获得的103株细菌进行产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶能力测试，发现有54个菌株能产生其中1种或多种酶，选择产酶能力全面且水解圈直径与菌落直径之比较大的菌株JHX3-1和JHXR4-4，经16SrRNA基因测序和比对，分别鉴定为暹罗芽孢杆菌（Bacillussiamensis）和贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusve-lezensis）。菌株JHX3-1的蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶酶活力均呈先上升后下降的趋势，最大值分别在60h、24h、48h处出现；JHXR4-4的蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶酶活力均呈先上升后下降的趋势，最大值分别在24h、48h、72h处出现。 4.以菁松×皓月杂交种家蚕为研究对象，在不同龄期饲料中添加短乳杆菌CSHRR5-3菌液，结果显示在家蚕三龄或四龄时单独添加供试菌，可以提高家蚕在四龄的存活率和五龄期的体重；在五龄期添加供试菌，存活率稍有提高，茧质均匀度较好，但全茧量和茧层量显著性下降；在三龄、四龄和五龄三个龄期同时添加菌液，到五龄期时，存活率有显著性下降。综合各项指标，在四龄期添加该益生菌株对家蚕的生长发育较好。
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