目的 1.探讨乙酰辅酶A羧化酶α（Acetyl-CoAcarboxylasealpha，ACC1）在肝细胞肝癌（HepatocellularCarcinoma，HCC）中的表达及其与肝癌患者临床病理参数之间的关系。 2.明确ACC1的编码基因ACACA对肝癌细胞增殖、迁移等恶性表型的影响。 3.初步研究ACC1调控肝癌恶性表型的分子机制。 方法 1.应用生物信息学分析，基于癌症蛋白质组图谱（TheCancerProteomeAtlasPortal，TCPA）数据库中筛选出具有显著预后意义的蛋白—ACC1。应用Oncomine（https://www.oncomine.org/）数据库分析ACC1编码基因ACACA在泛癌中的表达水平。 2.使用肿瘤免疫分析资源（TumorImmuneEstimationResource，TIMER）数据库进行ACACA的泛癌表达分析，利用HCCDB数据库对ACACA在肝细胞癌各亚组中的表达进行分析。 3.在癌症基因组图谱（TheCancerGenomeAtlas，TCGA）数据库中评价在高表达ACACA和低表达ACACA肝癌样本中干性指数的差异，并初步探索ACACA与免疫细胞浸润的关系。 4.运用基因本体（GeneOntology，GO）、京都基因与基因组百科全书（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG）等富集分析预测ACACA与相关细胞信号通路的关系。单细胞转录组测序（Single-cellRNAsequencing，scRNA-seq）数据集分析ACACA在肿瘤微环境（Tumormicroenvironment，TME）中的表达特征。 5.通过细胞功能实验包括细胞计数试剂盒-8（CellCountingKit-8，CCK8）实验、划痕实验、Transwell实验、肿瘤成球实验、流式细胞术等，明确ACACA在HCC细胞恶性生物学行为中的潜在调控作用。 6.通过生信分析以及分子生物学实验，探索ACACA调控HCC细胞上皮间质转化（Epithelial-mesenchymaltransition，EMT）及Wnt/β-catenin信号通路的分子机制。 结果 1.基于TCPA数据库，发现ACC1是唯一在总生存期（Overallsurvival，OS）、无病生存期（Diseasefreesurvival，DFS）和无进展生存期（Progressionfreesurvival，PFS）中皆具有统计学意义的蛋白，提示其可能为潜在的肝癌预后标志物。 2.在TCGA数据库中进一步分析ACC1的编码基因ACACA，结果显示，与正常组织相比，ACACA在HCC中显著高表达，且与HCC患者的OS、疾病特异性生存期（Diseasespecificsurvival，DSS）、无进展间隔期（Progressionfreeinterval，PFI）显著相关。 3.定量逆转录聚合酶链反应（Quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction，qRT-PCR）技术验证敲低效率，结果显示转染了si-ACACA-1#，si-ACACA-2#的SK-Hep1肝癌细胞系敲低成功。 4.在瞬时转染的敲低细胞系中进行划痕、Transwell、克隆、细胞周期以及干性成球等功能实验，结果显示敲低ACACA可以明显抑制肝癌细胞的迁移、增殖、克隆形成和自我更新能力。 5.ACACA与Wnt/β-catenin信号传导和肿瘤干细胞（Cancerstemcells，CSC）特性显著相关，进一步相关分析表明，ACACA与Wnt通路标记物（β-catenin、CTNNB1、CCND1、MYC）和肿瘤干细胞标记物（CD44、PROM1、POU5F1）呈正相关。敲低ACACA显著降低了细胞核中β-catenin的荧光强度。蛋白免疫印记显示，抑制ACACA表达可显著下调SK-Hep1细胞中β-catenin、CD44、c-Myc和CyclinD1的表达水平。此外，ACACA沉默诱导Vimentin和N-cadherin表达下调，E-cadherin表达上调，表明其参与EMT过程。 6.在TCGA-LIHC数据集中研究了ACACA表达与免疫细胞浸润之间的关系。通过单样本基因集富集分析（Single-samplegenesetenrichmentanalysis，ssGSEA）分析了ACACA水平与24种免疫细胞的相关性。ACACA的表达与嗜酸性粒细胞、T辅助细胞、Tcm和Th2细胞呈正相关，与DC细胞、CD8+T细胞和NK细胞呈负相关。单细胞数据集分析显示，ACACA可明显富集在CD8+T细胞等免疫细胞亚群中。以上结果提示ACACA在TME中具有潜在调控作用。 结论 通过TCPA数据库筛选出肝癌中唯一具有预后意义的蛋白—ACC1，进一步在TCGA-LIHC数据库中明确了其编码基因ACACA在肝癌中高表达且与预后差相关。敲低ACACA可以显著抑制HCC细胞的迁移、增殖、克隆形成以及自我更新能力。ACACA可能参与肿瘤免疫微环境的调控。机制分析显示，ACACA可能通过激活肝癌细胞上皮间质转化及Wnt/β-连环蛋白信号通路促进肝癌进展。本研究提示ACACA可能是HCC的潜在生物标志物和分子靶点。
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