摘要
第一部分 肺腺癌浸润前后病理演变与SHOX2、RASSF1A基因甲基化水平的关系研究 目的：探究SHOX2、RASSF1A甲基化水平与早期肺腺癌病理演变的关系，同时初步探索SHOX2、RASSF1A甲基化的阳性率与肺腺癌高侵袭性特征的关系。 方法：SHOX2和RASSF1A甲基化水平检测采用定量甲基化特异性聚合酶链式反应(quantitativemethylationspecificpolymerasechainreaction,QMSP)进行定量分析，使用LungMe?检测试剂盒。利用GraphPadPrism8.0绘制ROC曲线，分析并验证了SHOX2和RASSF1A的诊断效能以及截断值。分析不同T分期与SHOX2、RASSF1A甲基化水平的关系，同时使用logistic多因素回归分析影响与甲基化阳性相关的独立因素。 结果：共218例患者入组，包括原位癌20例，微浸润性腺癌36例，浸润性腺癌128例，良性肿瘤34例。ROC曲线发现，SHOX2、RASSF1A以及二者联合甲基化检测的AUC分别为0.612、0.738、0.744，同时计算出SHOX2和RASSF1A截断值分别为7.14和8.25。在对良恶性肿瘤的鉴别上，SHOX2(p=0.033)和RASSF1A(p=0.003)具有显著优势。使用单因素ANOVA检验进行病理演变不同阶段间差异性分析，RASSF1A(p=0.041)和SHOX2(p＜0.001)都具有统计学差异，RASSF1A和SHOX2联合检测可有效区分AIS和MIA(p＜0.05)。多因素分析肿瘤组织样本中SHOX2、RASSF1A基因甲基化阳性率与性别、肿瘤直径、病理类型、胸膜侵犯、实性结节有显著相关性（p＜0.001）。 小结：SHOX2、RASSF1A甲基化联合检测可以显著区分AIS和MIA，为未来早期肺癌的分子诊断提供依据。甲基化发生的高危因素与肺腺癌的高侵袭性特征相关。 第二部分 非小细胞肺癌术后胸腔引流液SHOX2和RASSF1A甲基化检测的临床价值 目的：探讨手术治疗I-Ⅲ期非小细胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer,NSCLC）术后胸腔引流液SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测的临床价值。 方法：2021年05月至2022年12月，106例不能耐受肺叶切除的NSCLC患者接受了妥协性亚肺叶切除手术，同期93例肺叶切除治疗的NSCLC作为对照。收集术中开胸后但未进行肿瘤切除前的胸腔冲洗液以及术后不同时间段（术后1h,24h,72h）胸腔引流液，分别行细胞学检测，同时采用QMSP行SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测。单因素和多因素分析与胸腔引流液中SHOX2、RASSF1A基因甲基化阳性表达的独立相关因素。对引流液阳性表达的患者进行独立队列分析，探讨甲基化阳性检测的最佳窗口期。术后随访14-32月，制作Kaplan-Meier生存曲线，主要研究终点是无复发生存时间（recurrencefreesurvival,RFS）。 结果：所有患者无论是开胸后但未进行肿瘤切除前的胸腔冲洗液还是术后引流液，细胞学检测均未见癌细胞。开胸后未进行肿瘤切除前的冲洗液SHOX2、RASSF1A基因甲基化联合检测均为阴性。术后引流液中SHOX2、RASSF1A基因联合甲基化检测阳性，亚肺叶切除16例（16/106），肺叶切除3例（3/93）。多因素分析肿瘤直径（OR3.27,95%CI3.02-3.54），切缘距肿瘤距离（OR0.39,95%CI0.35-0.43），腺癌组织学分级（OR2.12,95%CI1.88-2.40），手术方式（OR6.59,95%CI5.93-7.33）是SHOX2、RASSF1A基因联合甲基化检测阳性的独立预后因素（p＜0.001）。术后1h、24h、72h三次收集患者胸腔引流液，其中RASSF1A基因甲基化阳性分别为1例、1例、0例，SHOX2基因甲基化阳性为15例、6例、3例。根据甲基化检测的ΔCt值绘制小提琴图行差异性比较：对于RASSF1A甲基化三个时间点之间相互比较无明显统计学差异(1hversus24hp=0.69,1hversus72hp=0.59,24hversus72hp=0.33)。对于SHOX2甲基化术后1小时较术后24小时、72小时更易检出甲基化阳性结果(1hversus24hp=0.03,1hversus72hp=0.02)，而24小时对比72小时则无明显统计学差异(24hversus72hp=0.48)。术后随访截至2023年12月，平均14-32月，结果显示19例SHOX2、RASSF1A基因联合甲基化检测阳性组中死亡1例，复发或转移6例，无病生存12例。SHOX2、RASSF1A联合甲基化阳性与阴性患者无病生存期无明显差异（P=0.624）。 小结：手术治疗非小细胞肺癌术后胸腔引流液SHOX2、RASSF1A基因甲基化阳性与肿瘤的大小、手术切缘高度相关。术后1h检测为阳性最佳窗口期。对术后局部复发预测需要更多的数据支持。
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