摘要
姜黄素（CUR）是一种天然多酚治疗剂，具有广泛的药理作用，包括抗炎、抗氧化和免疫调节等。但由于水溶性低、体内易降解和代谢等缺陷导致其临床应用受限。胡椒碱（PIP）是一种具有抗氧化、抗炎和免疫调节等药理作用的天然生物碱。它能够抑制多种药物代谢酶，是多种药物的生物增强剂。本课题将姜黄素与胡椒碱联用，制成姜黄素胡椒碱复方自乳化纳米给药系统（CUR-PIP-SNEDDS），以期在解决姜黄素上述问题的同时，发挥协同抗炎的作用。因而制备了CUR-PIP-SNEDDS并对其进行药代动力学研究和体内外药效学评价。 首先通过单因素实验和伪三元相图法筛选出复方自乳化纳米给药系统的辅料，即油相Capryol90、表面活性剂KolliphorRH40和助表面活性剂PEG400。采用单纯形网格优化法和效应面法优化并确定复方自纳米乳化给药系统的处方组成。最佳处方为Capryol90：10%，KolliphorRH40：60%，PEG400：30%。然后对制剂进行表征，其乳化后纳米乳滴形态呈均匀的圆球形，粒径大小为16.91±0.73nm，PDI为0.095±0.034，Zeta电位为-13.77±0.74mV；其中姜黄素的包封率与载药量分别为98.46±0.78%和19.21±0.41mg/g，胡椒碱的包封率和载药量分别为90.94±0.70%和3.84±0.10mg/g；稀释倍数和稀释介质pH对制剂稳定性影响不显著，且6个月的长期稳定性良好；体外释放结果表明制剂中的姜黄素和胡椒碱在pH1.2和pH6.8的释放介质中180min的累积释放率均能达到79%以上，且在pH1.2的盐酸溶液中于90min便释放完全，显著提高了药物的溶出度和溶出速率，利于药物在胃肠道的吸收。 以新西兰兔为实验对象，对CUR-PIP-SNEDDS进行药代动力学研究，得到药时曲线和药物代谢动力学参数。根据结果显示，CUR-PIP-SNEDDS中姜黄素和胡椒碱在家兔体内的药代动力学过程都符合二室模型，权重系数为1/C2。相比于姜黄素胡椒碱混悬液（CUR-PIP），该制剂中姜黄素和胡椒碱的Cmax明显增高，分别从0.61±0.08mg/L、0.47±0.07mg/L增加到1.90±0.19mg/L、0.62±0.12mg/L；体内驻留时间MRT0-t明显延长，分别从4.53±0.27h、4.19±0.30h增加到7.34±0.31h、6.26±0.35h；AUC0-t明显增高，分别从3.18±0.69mg/(L·h)、1.21±0.28mg/(L·h)增加到11.90±0.75mg/(L·h)、2.93±0.31mg/(L·h)，是原来的3.7和1.4倍左右，证明CUR-PIP-SNEDDS能够充分延长药物在体内的时间，提高药物的生物利用度。 对CUR-PIP-SNEDDS在细胞因子风暴小鼠体内的药效学进行研究。将小鼠随机分为空白对照组、模型组、地塞米松（Dex）阳性对照组、CUR-PIP-SNEDDS组、CUR-SNEDDS组和CUR-PIP组，考察不同药物制剂对小鼠细胞因子风暴的影响。空白对照组和模型组均口服生理盐水，实验组口服不同的姜黄素制剂，阳性药物组腹腔注射地塞米松生理盐水溶解液（30mg/kg），40min后，腹腔注射脂多糖（LPS5mg/kg）诱导细胞因子风暴，空白对照组小鼠注射等体积生理盐水，6h后摘除小鼠眼球采集血样并处死，取出肺组织、胸腺、肝脏和脾脏。比较不同组的器官指数、血浆和肺匀浆中TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ和MCP-1的含量、肺组织湿干重比值和病理形态及评分。结果显示给药组均有一定缓解作用，CUR-PIP-SNEDDS效果最好，且明显优于另外两种制剂，其次为CUR-SNEDDS。 对CUR-PIP-SNEDDS进行单核巨噬细胞RAW264.7的体外药效学研究。用脂多糖刺激建立体外细胞炎症模型，将细胞分为对照组、模型组（1μg/mLLPS）、Dex阳性对照组（50µmol/L）和CUR-PIP-SNEDDS给药组（CUR浓度6.25、12.5、25、50µmol/L，对应PIP浓度分别为1.25、2.5、5、10µmol/L）。通过MTT法测对细胞活力的影响，证明CUR-PIP-SNEDDS中CUR在6.25-50µmol/L、PIP在1.25-10µmol/L范围内对细胞存活率无显著影响；通过ELISA法考察CUR-PIP-SNEDDS对细胞中TNF-α、IL-1β和MCP-1的影响，结果表明给药组能明显抑制细胞中各促炎因子含量的升高，证明CUR-PIP-SNEDDS能够减少促炎因子的过量分泌，有效缓解细胞炎症。 综上所述，CUR-PIP-SNEDDS能显著提高药物的生物利用度，可以发挥姜黄素和胡椒碱的协同抗炎作用，能更有效地缓解细胞因子风暴，减少炎症并发症。
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