摘要
白皮杉醇是一种广泛存在于水果和植物中的天然多酚类化合物，具有抗肥胖、抗癌、抗炎和保护心血管等多种功能活性。但由于白皮杉醇结构中酚羟基和碳碳双键的存在，使其化学性质不稳定，极易受到环境中氧气、温度和pH值的影响而发生变性，并且白皮杉醇难溶于水使其难以通过口服吸收，肠道渗透性差，生物利用度低，这些特性使其开发和应用受到了很大限制。目前对白皮杉醇的纳米递送体系的研究十分有限，主要集中在加工稳定性方面，对其口服过程中小肠渗透性差及递送体系在体内的吸收转运机制缺乏全面的探究。因此，本研究通过酶解法构建豌豆白蛋白多肽纳米胶束来作为口服递送的载体来递送白皮杉醇，并多方面评估其包封效果;并通过体外模拟实验评价其理化及胃肠道稳定性、抗氧化性;基于Caco-2单细胞及单层细胞模型进行定性和定量表征，全面探究递送体系细胞摄取含量及小肠跨膜渗透性，解析其内吞及胞内转运机制。主要研究结果如下: （1）利用酶解豌豆白蛋白多肽自组装的方法制备了负载白皮杉醇的纳米胶束，并对包封效果进行表征，结果发现白皮杉醇添加量为14％时制备的负载白皮杉醇的纳米胶束的粒径小（69.77±0.50nm）、包埋率高（84.12±3.27％）、负载率高（70.37±0.83μg/mg），且具有光滑规则形态的负载白皮杉醇多肽纳米胶束。荧光光谱和傅里叶红外光谱证明了白皮杉醇主要通过疏水相互作用和氢键与多肽相结合，通过X射线衍射观察到白皮杉醇以无定型形式包裹到多肽纳米胶束中。 （2）负载白皮杉醇的纳米胶束具有良好的物理化学稳定性，在0-100mM盐离子环境、极酸性、中性和微碱性环境、4℃储藏28d、100℃加热30min条件下仍保持稳定。在模拟胃肠消化的过程中的氨基酸增长率和电泳图谱表明多肽纳米胶束具有良好的稳定性，白皮杉醇在胃肠阶段保留率提高至80.54％。此外，负载白皮杉醇的纳米胶束具有良好的抗氧化性，对于DPPH自由基和ABTS自由基的清除率略有下降，而纳米胶束的羟基自由基清除率有显著提高，是游离白皮杉醇的3.84倍。 （3）负载白皮杉醇的多肽纳米胶束具有良好的细胞安全性，其Caco-2细胞的摄取量是游离白皮杉醇的2.88倍，主要通过网格蛋白介导的内吞和巨胞饮两种基于主动运输的内吞途径进入细胞。Caco-2单层细胞模型结果显示多肽纳米胶束的小肠渗透性显著增强，透过量是游离白皮杉醇的1.70倍，并且不受P-糖蛋白介导的药物外排作用，负载白皮杉醇多肽纳米胶束的渗透过程涉及内质网向高尔基体和高尔基体向质膜两种胞内转运途径，不涉及细胞旁路的转运。
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