摘要
骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是一种恶性骨肿瘤，主要发生在儿童和青少年的长骨处，如股骨、胫骨和肱骨等部位。虽然骨肉瘤原发于骨骼系统，但它也可以通过血行、淋巴系统产生转移，通常以肺部为主要转移目标。而骨肉瘤的转移与炎性因子密切相关。炎性因子，如白细胞介素等可影响肿瘤微环境的免疫应答和血管生成，促进肿瘤转移。然而，炎性因子在骨肉瘤转移中的相关机制尚不明确。本文通过差异分析，蛋白质互作网络构建，K-M分析等生物信息手段筛选骨肉瘤转移的关键靶点，并探究炎性因子对骨肉瘤转移的调控作用。 通过GEO数据库下载骨肉瘤相关转录组数据，并使用limma工具进行差异分析，筛选出骨肉瘤转移的相关基因。再利用蛋白质互作网络构建和K-M分析等生物信息学方法确定了CCNB2为骨肉瘤转移的关键靶点。在骨肉瘤细胞中转染siRNA敲低CCNB2表达后，利用体外细胞实验CCK8、Transwell、Westernblot、ELISA和免疫荧光实验技术，阐明CCNB2在骨肉瘤细胞转移中的功能与对骨肉瘤免疫微环境的潜在机制。 通过转录组差异基因筛选，以及对排名前20的hubgene进行K-M分析鉴定，CCNB2为骨肉瘤转移的最关键靶点。在转染siCCNB2后发现，CCNB2的低表达能够有效抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力，同时影响上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的进程。进一步对CCNB2的上游调控因子进行探索，发现IL-6可以促进骨肉瘤细胞的迁移侵袭能力和EMT进程，并影响CCNB2的表达量。在IL-6处理后，NF-κB被活化并进入细胞核，JSH23（NF-κB抑制剂）的处理可以抑制IL-6对CCNB2表达的增强作用，进一步证明IL-6通过激活NF-κB信号通路来增强CCNB2的表达。最后，将骨肉瘤细胞与巨噬细胞共培养模拟肿瘤微环境，发现了骨肉瘤细胞CCNB2低表达后会使肿瘤微环境中的巨噬细胞向M1方向极化，从而抑制骨肉瘤细胞的转移能力。 综上所述，CCNB2是骨肉瘤转移的关键靶点，被IL-6通过激活NF-κB信号通路所调控，并且骨肉瘤CCNB2低表达会促使肿瘤微环境巨噬细胞向M1方向极化，最终影响骨肉瘤自身转移，为抗肿瘤转移提供免疫学视角。
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