摘要
鸡皮刺螨(Dermanyssusgallinae，PRM)是一种专性体外寄生虫，以家禽血液为食，给蛋鸡养殖业造成巨大的经济损失。目前，养鸡生产中主要依赖化学药物来防控鸡皮刺螨。然而，过度使用化学合成杀虫剂会造成环境污染、螨虫耐药性增加、药物残留等问题。因此，寻找新的防控手段迫在眉睫。利用昆虫病原真菌防控鸡皮刺螨是一种环境友好的防控方法。然而，关于昆虫病原真菌对鸡皮刺螨的致病性相关研究较少。因此，本研究观察了鸡皮刺螨的一种病原真菌——米曲霉侵染螨虫体表的过程。并对米曲霉代谢产物中的杀螨活性化合物进行分离鉴定和多方面效果评价。 1.米曲霉侵染鸡皮刺螨过程的显微观察 使用体视显微镜和扫描电子显微镜观察了米曲霉侵染鸡皮刺螨的过程和鸡皮刺螨的形态变化。发现米曲霉的侵染过程包括附着、萌发、穿透、次级侵染四个环节。在侵染初期，分生孢子在螨虫体表附着，偏好于较为粗糙的表面，此时螨虫无明显异常。接着，分生孢子萌发形成芽管、附着胞、穿透菌丝等穿透结构，在宿主体表的合适位置进行穿透，进入鸡皮刺螨体内，最终导致螨虫死亡。死亡1-3d后，白色菌丝开始从虫体内穿出。死亡4-6d后，螨虫表面出现分生孢子梗或成熟的孢子，最后虫体被完全成熟的绿色孢子覆盖，米曲霉开始感染种群中的其他个体。 2.米曲霉杀螨活性代谢产物的分离与鉴定 采用生物活性引导法对米曲霉菌体乙酸乙酯提取物进行柱色谱及薄层色谱的分离纯化，筛选出杀螨效果最好的组分Fr.5-1。Fr.5-1进一步通过LC-MS/MS分析鉴定出17个主要化合物。生物测定结果表明，其中9种化合物具有一定的杀螨效果。杀螨活性较好的三种化合物是N,N-二甲基癸烷基-N-氧化胺、邻苯二甲酸单丁酯和三乙醇胺，其LC50值分别为0.568mg/mL、2.014mg/mL、2.333mg/mL。这些化合物在鸡皮刺螨的防治中具有一定的应用潜力。 3.米曲霉杀螨活性代谢产物的防控效果评估 对杀螨效果较好的三种活性代谢产物N,N-二甲基癸烷基-N-氧化胺、邻苯二甲酸单丁酯和三乙醇胺进行杀卵活性的测定，结果表明N，N-二甲基癸烷基-N-氧化胺的杀卵活性最高，在5mg/mL的浓度下能造成72.22±9.62％的卵发育异常。 对两种挥发性代谢产物枯茗醛和2,4-二甲基苯甲醛的熏蒸毒性进行评估,结果显示2,4-二甲基苯甲醛的熏蒸毒性高于枯茗醛，在0.5mg/cm3浓度下能够导致83.33±3.34％的螨虫死亡。同时，本研究检测了这两种挥发性代谢产物对鸡皮刺螨的驱避作用。结果显示，二者对鸡皮刺螨成年雌螨均具有一定的驱避效果，在1μg剂量的处理下两种化合物对鸡皮刺螨的驱避活性与对照组相比具有显著性差异。 综上所述，本研究观察了昆虫病原真菌米曲霉侵染鸡皮刺螨的过程，初步探究了米曲霉侵染鸡皮刺螨的机制。同时，分离鉴定出米曲霉代谢产物中的几种杀螨活性成分，并对这些代谢产物进行了杀卵活性、熏蒸毒性、驱避活性等多方面效果的评估,为利用米曲霉及其代谢产物防控鸡皮刺螨提供一定的理论参考。
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