摘要
蜂毒（beevenom,BV）是由工蜂的毒腺或副腺分泌的具有芳香气味的透明液体，它是一种具有重要功能的复杂化合物，包括蜂毒肽（melittin,Mlt）、磷脂酶A2（phospholipaseA2,PLA2）、透明质酸酶（hyaluronidase,Hya）等多种物质。研究表明蜂毒和蜂毒肽具有抗氧化、抗炎、抗衰老等作用，而关于蜂毒和蜂毒肽在抗皮肤衰老方面的研究还鲜有报道。 本研究通过分析小鼠体重变化、脏器指数、血清生化指标以及肝肾组织切片结果来初步评估蜂毒和蜂毒肽给药之后的安全性。在此基础上，将小鼠随机分为正常组（NC组）、衰老模型组（D-gal组）、阳性对照组（VC组）、蜂毒低剂量组（BV-L组）、蜂毒高剂量组（BV-H组）、蜂毒肽低剂量组（Mlt-L组）、蜂毒肽高剂量组（Mlt-H组），分别注射对应的药物。通过记录小鼠体重变化，生化法检测抗氧化指标，HE染色观察小鼠皮肤结构变化，Masson染色观察皮肤胶原纤维含量，实时荧光定量检测胶原蛋白、炎症因子等基因含量。最后，通过非靶向代谢组学检测小鼠皮肤差异代谢物，进而分析其抗衰老代谢机理。主要研究结果如下： 1、经皮下注射蜂毒和蜂毒肽后，小鼠体重较NC组相比下降，但差异不显著；各组之间脏器指数（心、肝、脾、肺、肾）改变不显著；血清生化指标（ALT、AST、TBIL、BUN、UA和CREA）均在正常医学参考值范围内；HE染色观察肝肾组织切片发现，给药之后并没有引起肝肾组织的病变，且无炎性细胞浸润。结果表明，1mg/kg、0.5mg/kg的蜂毒和蜂毒肽的注射剂量是相对安全的。 2、HE、Masson染色结果显示，D-gal组表皮-真皮连接不紧密，表皮层和真皮层厚度降低，胶原纤维含量下降，经蜂毒和蜂毒肽处理后提高了小鼠皮肤表皮和真皮层的厚度，并增强了皮肤胶原纤维的含量。 3、不同剂量蜂毒和蜂毒肽较D-gal组相比体重升高，且BV-L组改善作用较明显；D-gal（500mg/kg）颈背部皮下注射49天后，与NC组相比，D-gal组SOD、GSH-PX活性显著降低，CAT活性极显著下降，MDA含量极显著下降，说明D-gal衰老模型造模成功。VC组及不同剂量蜂毒和蜂毒肽组与D-gal组相比，SOD、GSH-PX和CAT活性均有不同程度的升高；此外qPCR结果表明，与NC组相比，D-gal组中Col1a1、Col3a1表达量极显著下降，IL-1β表达量极显著升高，IL-10表达量极显著下降；蜂毒和蜂毒肽可以提高Col1a1、Col3a1、IL-10mRNA含量，降低IL-1βmRNA含量，且BV-H组和Mlt-L组作用更显著。 4、LC-MS/MS非靶向代谢组学结果显示，OPLS-DA模型清晰区分了NC组与D-gal组、D-gal组与VC组、D-gal组与BV-H组、D-gal组与Mlt-L组。BV-H组与D-gal组相比有56种差异代谢物回调，Mlt-L组与D-gal组相比有35种差异代谢物回调。BV-H组主要通过调节磷酸戊糖途径、碳代谢、半乳糖代谢和β-丙氨酸代谢途径缓解D-gal引起的小鼠皮肤衰老，而Mlt-L组可能通过调节脂质与动脉粥样硬化和胆固醇代谢途径来改善D-gal引起的皮肤代谢紊乱。 本研究在评估了蜂毒和蜂毒肽试验剂量安全性后，进一步分析了二者抗皮肤衰老作用效果及机理。研究结果为蜂毒及其单一成分在皮肤保护和抗衰老领域的应用提供一定的理论支撑，同时丰富了蜂毒药理学研究的基础数据。
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