摘要
延胡索是著名的“浙八味”之一，具有活血化瘀、行气止痛等作用。在延胡索药材的加工过程中，不同的加工方法往往会影响延胡索饮片中的化学成分，进而影响其药理作用，甚至会影响它的性状。目前，关于炮制方法对延胡索饮片中化学成分和药理作用影响的研究有很多，但对于饮片性状的研究却很少。而根据2020版《中国药典》规定，延胡索饮片的性状需要满足“切面或断面黄色，角质样，具蜡样光泽”，我们以此为最低标准，对延胡索饮片性状展开研究。此外，由于延胡索药材的产地差异，饮片中的生物碱含量也会存在一定差异，这将直接影响延胡索的药效和使用效果。为了更好地控制延胡索饮片的质量，我们将深入研究延胡索炮制工艺对饮片性状的影响因素以及不同产地延胡索饮片中化学成分的差异。具体研究内容如下： （1）以显微镜辅助差示扫描量热仪（DSC）测定含水量对延胡索淀粉糊化和老化特性的影响：本研究考察了升温速率和制样方法对DSC测定延胡索淀粉糊化行为的影响；探讨了药材与淀粉之间的糊化差异；以显微镜辅助DSC技术，深入剖析了含水量对延胡索淀粉的糊化与老化特性的影响。结果表明，升温速率为10℃/min时能得到较好的吸热曲线，两个制样方法都能用来检测淀粉的G吸热，而制样方法二能同时检测到G和M1吸热。在含水量40%左右时，延胡索淀粉开始糊化，并随着含水量的上升，其糊化焓逐渐增大，淀粉的糊化程度也随之增大；而淀粉的老化焓先增大再减小，形成的凝胶物质逐渐增多，并相互连接成不同的结构。在含水量为60%时，糊化焓值稳定，淀粉基本完成糊化，老化程度高，形成了一个稳定的三维凝胶结构。与延胡索淀粉糊化的过程相比，延胡索药材中的一些成分会阻碍药材中淀粉的糊化，但糊化焓变化趋势基本一致，说明淀粉糊化程度可以作为衡量药材整体糊化状态的重要指标。这些发现为进一步探究延胡索淀粉对延胡索饮片性状的影响提供了重要参考。 （2）基于QbD理念结合DSC研究延胡索淀粉的糊化度与性状之间的关联：以DSC测定延胡索淀粉在不同条件下的焓值，并以此计算淀粉的糊化度。基于QbD理念筛选出三个关键工艺参数（CPPs）。通过Box-Behnken实验建立关键工艺参数（CPPs）和关键质量属性（CQAs）间的数学模型，并以此建立设计空间；最后，选取较优操作空间，并进行工艺验证。以显微镜观察不同糊化度淀粉颗粒的形貌，并与Box-Behnken实验结果相结合，以此区分满足最低糊化度需求的淀粉颗粒。结果表明，筛选出的能显著影响淀粉糊化度的三个关键工艺参数为含水量、加热温度和加热时间。糊化度大于52%的延胡索淀粉能满足中国药典对延胡索药材性状的要求，鉴于此，较优操作空间确定为含水量55%-70%、加热温度80-90℃、加热时间5-8min。糊化度大于52%的延胡索淀粉在显微镜下可观察到淀粉颗粒破裂，淀粉分子溶出，淀粉颗粒边缘不规则的现象。本文探索了不同加工方法对延胡索淀粉糊化度的影响以及淀粉糊化度与性状之间的关联，为获得更优质的延胡索饮片提供一定的参考。 （3）润药方法对低含水量延胡索药材糊化的影响：考察了传统润药和真空润药对低含水量延胡索的影响。结果表明，传统润药方法，可采用浸泡1h，闷润11h，重复操作四次的方法对低含水量延胡索药材进行润制。但由于操作时间长，药材在此过程中容易滋生细菌。真空润药方法中，通过单因素实验，得到润药的最佳条件为浸泡4h，真空1h，真空温度55℃。此方法能够很大程度上缩短润药所需的时间，并且减少药材在润药过程中发生霉变的机率。润药之后，药材含水量重新达到40%左右，可以发生糊化。本研究能够使低含水量延胡索在炮制后得到合格的性状，提高药材利用率，为延胡索的质量控制和加工提供一定的参考。 （4）延胡索饮片的指纹图谱方法建立和生物碱含量测定研究：通过考察流动相的种类、浓度以及柱温和流速对生物碱色谱行为的影响，建立指纹图谱。结果表明，在液相条件为：流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）；柱温为30℃；流速为1.0ml/min时，能得到较好的指纹图谱。在该液相条件下，测定了原阿片碱、盐酸黄连碱、延胡索乙素、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、盐酸脱氢延胡索碱6种生物碱的含量，这6种生物碱在对应线性范围内与其峰面积均呈现较好的线性关系。此方法简单、稳定，能快速评价延胡索的质量。 （5）对比单波长指纹图谱和棒状图在延胡索饮片不同产地鉴别中的应用：本文建立了14批延胡索饮片单波长指纹图谱与棒状图。通过对两者进行相似度评价，并结合化学计量学（HCA、PCA、OPLS-OA）对其进行系统的分析。结果表明，单波长指纹图谱有12个共有峰，棒状图有20个共有峰，棒状图能展现出更多的共有峰。相似度评价结果表明，两者相似度基本在0.9以上，相差不大。HCA和PCA的分类结果表明，两者都将延胡索饮片分为两类，但棒状图能够将相同产地的延胡索饮片分为一类，而指纹图谱则存在产地交叉的现象。OPLS-DA结果显示，棒状图的得分图中，分类结果更集中，结果更好。结合VIP值结果可知，单波长指纹图谱中VIP值大于1的成分有5个，棒状图中VIP值大于1的成分有11个，棒状图能检测到更多的影响延胡索饮片产地分类结果的化学成分，从而提高了饮片产地分类的精准度。因此，棒状图在对延胡索饮片的产地分类应用中，能够有效提高产地鉴别的效率，更好的控制延胡索饮片的质量。
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