摘要
【目的】 开展麸炒芡实炮制工艺研究，优化其工艺参数；并对麸炒芡实前后成分变化进行分析，明确其炮制后变化主要成分；探讨芡实经麸炒后对小鼠肾阳虚作用变化的影响；开展了麸炒芡实饮片质量标准研究，为临床用药提供优质的中药饮片提供科学依据。 【方法】 （1）麸炒芡实炮制工艺研究：采用HPLC法，以炒制温度、炒制时间、麦麸用量为考察因素，以α-生育酚、没食子酸、焦性没食子酸含量为评价指标；采用熵权法、层次分析法结合Box-Behnken响应面曲面设计法，利用DesignExpert11软件进行分析考察炒制温度、炒制时间、麦麸用量对麸炒芡实炮制工艺进行研究。（2）麸炒芡实炮制成分变化研究：运用UPLC-Q-TOF-MS/MS法，于正、负离子模式下，结合MassHunterQualitativeAnalysisB.06.00分析软件技术，依据化合物质谱信息以及保留时间并结合文献、METLIN数据库、HMDB数据库、MassBank数据库安捷伦中药对照品成分数据库以及PubChem数据库对化学成分进行裂解规律解析，确定化合物结构，并以相同成分进行峰面积比较。将分析得出芡实以及麸炒芡实的质荷比、保留时间、峰面积等数据，将处理完毕的数据随后导入SIMCA13.0软件，进行主成分分析（PCA）和偏最小二乘-判别分析（OPLS-DA），以确定成分之间的差异性。（3）取清洁级昆明雄性小鼠100只，每组10只。采用注射氢化可的松法，以复制小鼠肾阳虚模型。其中空白组正常饮食，模型组灌胃给予等量生理盐水，阳性对照组分别给予200mg•kg-1桂附地黄丸溶液和甲基睾酮溶液。其余组别分别给予高、中、低剂量(300mg•kg-1、150mg•kg-1、100mg•kg-1)的芡实与麸炒芡实水溶液。记录每日小鼠体质量，计算增重率。采用放射性免疫分析法，检测小鼠血清中T3、T4、ACTH、TSH、COR水平。采集肾脏，计算脏器指数。（4）麸炒芡实质量标准研究：根据2020版《中国药典》麸炒法（通则0213）规定，对12批次麸炒芡实进行薄层色谱鉴别；分别测定其水分、总灰分、浸出物等；采用HPLC法，建立麸炒芡实中焦性没食子酸、没食子酸、绿原酸、芦丁、α-生育酚等多种成分含量同时测定方法，为优选麸炒芡实优质饮片提供依据。 【结果】 （1）炮制工艺研究结果：通过层次分析法以及熵权法得焦性没食子酸、没食子酸、α-生育酚权重分别为0.1509、0.3874、0.4617。分别得各单因素优化范围：炒制温度为180~220℃，炒制时间为2.0~3.0min，麦麸比例为10∶1.2~10∶1.4。各因素对麸炒芡实炮制工艺的影响顺序为：麦麸比例＞炒制时间＞炒制温度。根据模型拟结合结果得最佳炮制工艺为炒制温度199.51℃、炒制时间2.49min、麦麸比1.28、综合评分为0.9702。结合生产实际，确定最佳炮制工艺参数为：炒制温度200℃，炒制时间2.5min，麦麸比1∶3。三次平行试验得出平均得分为0.9806，RSD值为0.63。（2）炮制成分变化结果：使用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术，共鉴定出147种化合物。在芡实中，正离子和负离子分别鉴定出22种和40种化合物；而在麸炒芡实中，正离子和负离子分别鉴定出32种和53种化合物。经过麸炒处理后，芡实中的没食子酸、表没食子儿茶素没食子酸酯、α-生育酚、以及原花青素B2等有效成分的含量有所增加；柑橘黄素、柑橘素B、表儿茶素3,5-二-O-没食子酸酯等含量减少。PCA结果表明，芡实麸炒前后化学成分具有明显差异，OPLS-DA分析得到负离子模式下：7-去羟基焦没食子酸-4-羧酸、原儿茶醛、没食子酸、表没食子儿茶素没食子酸酯等成分；正离子模式下得到表儿茶素、α-生育酚、表儿茶素没食子酸酯等VIP值大于1.4共16个差异性成分。（3）对于体质量和增重率，与空白组相比，模型组小鼠明显降低（P＜0.05）；阳性对照组Ⅰ、阳性对照组Ⅱ；芡实低、中、高；麸炒芡实低、中、高与模型组相比，小鼠体重明显增加（P＜0.05）；与空白组相比，模型组小鼠血清中T3、T4、ACTH水平明显降低，TSH、COR水平明显升高（P＜0.05）；与模型组相比，阳性对照组Ⅰ、阳性对照组Ⅱ；芡实低、中、高；麸炒芡实低、中、高小鼠血清中T3、T4、ACTH含量明显增加（P＜0.05）；TSH、COR含量明显减少（P＜0.05）；与空白组比较，模型组小鼠肾脏指数明显升高（P＜0.05）；模型组比较，芡实生品与麸炒芡实低、中、高剂量组以及阳性对照组小鼠肾脏指数明显降低（P＜0.05）。（4）质量标准研究结果。薄层色谱各斑点清晰，分离度好；12批麸炒芡实水分测定值为3.93%～9.64%，平均值为6.95%；总灰分测定值为0.16%～0.83%；浸出物测定值为11.81%～19.60%,平均值为14.59%。12批麸炒芡实焦性没食子酸、没食子酸、绿原酸、芦丁、α-生育酚平均值分别为0.1100、0.0359、0.0184、0.0152、0.6473mg/mL。 【结论】 (1)优选后的麸炒芡实炮制工艺，科学合理、稳定可靠，可为深入研究麸炒芡实奠定基础。(2)麸炒芡实炮制变化后的化学成分及含量存在差异，说明麸炒法对芡实主成分变化产生影响，但这种变化是否与药效变化存在关联，仍有待深入研究。(3)芡实及麸炒芡实都对氢化可的松复制的肾阳虚模型小鼠有较好疗效，说明芡实经麸炒后增强药物疗效，这为麸炒芡实在临床的推广应用提供了理论依据。可为后续研究麸炒芡实药效提供一点基础。(4)本研究开展的质量标准研究，是在以往质量标准研究基础上，新增的多个项目进行检测，目的是进一步提高麸炒芡实质量标准。本研究采用的TLC方法分离度良好，稳定可靠；含量测定方法稳定、准确性好。建议各成分不得低于平均值的80%，研究结果符合现版《中国药典》规定，可为麸炒芡实质量标准提供科学依据。
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