摘要
三阴性乳腺癌（TripleNegativeBreastCancer,TNBC）具有分化差、侵袭性高、肿瘤突变频率高等特点，其5年存活率相较其他乳腺癌亚型低70%。TNBC机制非常复杂，药物治疗过程中极易产生耐药性和全身毒性，因此开发针对TNBC特异性靶向和疗效显著的新型治疗手段比其他类型乳腺癌更为迫切。 功能化纳米颗粒（Nanoparticles,NPs）可以选择性靶向肿瘤部位并减少药物对其他器官的毒性。本课题设计并制备了一种基于Cu9S8结合NO前体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）的Cu9S8-SNAP（C-S）NPs，其可实现对TNBC的光热治疗（PhotothermalTherapy,PTT）、化学动力学治疗（ChemodynamicTherapy,CDT）和气体治疗（GasTherapy,GT）联合的多模式治疗。进利用可与肿瘤细胞表面CD44受体相结合的血小板膜（PlateletMembrane,PM）对C-SNPs进行修饰，最终制备得到具有高生物相容性，且可以主动靶向肿瘤组织的多功能纳米颗粒Cu9S8-SNAP@PM（C-S@P）。本研究的具体实验方案和研究结果如下： 1.通过原位硫化方法合成粒径约为142.5±0.6nm的Cu9S8NPs，将其作为载体，利用酰胺反应的酰胺键结合，使NO释放前体SNAP修饰于Cu9S8NPs表面，得到粒径约为160±1.2nm的C-SNPs。将从鼠源全血中提取的PM与C-SNPs在超声下利用超声复合法进行膜包被，得到粒径约为180±1.6nm的C-S@PNPs，其Zeta电位为-23±1.1mV。对多功能纳米颗粒C-S@P进行微观的颗粒表征及对其光热性能、化学动力性能、一氧化氮热响应释放性能和体外药物释放等材料性质进行考察。C-S@PNPs在1064nm激光照射下表现出约45.12%的光热转换效率，且其光热性能可使其毒性•OH生成率和NO释放率相比于常温条件下分别提高至4倍和5倍左右。另外，常温下，C-S@P中SNAP释放速率明显低于C-SNPs，表明PM的包被还具有防止药物泄露的优势。 2.通过细胞活力检测试剂盒（CellCountingKit-8,CCK-8）评价PM包被的Cu9S8（Cu9S8@PM）对乳腺癌细胞4T1细胞和正常细胞L929细胞的毒性。CCK-8毒性实验显示4T1细胞和L929细胞与100μg/mL的Cu9S8@PMNPs孵育24小时后，存活率仍保持在90%以上，表明Cu9S8@PMNPs细胞毒性低，具有较好的生物相容性。共聚焦激光扫描显微镜（ConfocalLaserScanningMicroscopy,CLSM）下的细胞摄取实验发现相同条件下，细胞对C-S@PNPs的摄取量明显高于C-SNPs的，表明PM涂层可促进4T1细胞对NPs摄取，具有主动靶向肿瘤细胞的能力。C-S@P+H2O2+L治疗组4T1细胞和MCF-7细胞的活性几乎被完全杀灭（线粒体膜电位降低近20倍、死细胞比例将近100%等），表明C-S@P+L对乳腺癌细胞进行的PTT、CDT和GT联合治疗具有优异的治疗效果。 3.分别建立4T1和MDA-MB-231三阴性乳腺癌肿瘤模型，通过活体成像系统观察尾静脉注射后，C-S@P和C-S在荷瘤小鼠的体内分布。结果显示在相同时间点，C-S@P较C-S组小鼠肿瘤部位荧光信号更强，提示PM包被后C-S@P可以更加有效地靶向聚集到肿瘤部位。此外，在1064nm激光照射后使肿瘤部位温度上升明显，证明C-S@P在体内具有优异的光热性能。在治疗周期结束后，C-S@P+L组的肿瘤体积比PBS对照组小24倍左右，且其肿瘤组织的细胞被严重损坏，表现出激光引导下的C-S@P对肿瘤部位进行的PTT、CDT和GT联合的多模式治疗具有效果强烈的消融作用。C-S@P治疗组主要脏器的细胞结构和功能与对照组相比无统计学差异指示C-S@PNPs具有很好的体内生物相容性。
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