摘要
葡萄籽原花青素（GSP）表现出极强的抗氧化、消除氧自由基的作用，已有研究表明在创面愈合过程中表现出显著的作用效果，但其中的潜在机制尚不明确。研究发现ROS作为上游信号诱导线粒体自噬，由此猜测GSP可经信号通路调控线粒体自噬。目的探索GSP在体内体外是否通过下调氧化应激调控线粒体自噬以促进创面愈合及其作用机制。方法在体内实验中，建立小鼠创伤模型，分为正常组、对照组和GSP组。动态追踪创面愈合情况，观察肉芽形成、胶原沉积和血管新生情况。采用透射电镜、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色和试剂盒等方法，检测组间线粒体自噬、ROS水平及相关蛋白表达量差异。使用JNK抑制剂佐证p-JNK在创面愈合中的作用机制。在体外实验中，使用H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）发生氧化应激，检测GSP对HUVECs毒害作用。于最佳浓度下，组间对比相关蛋白表达量和ROS水平。结果体内实验中，与对照组相比，GSP加速创面愈合，促进创面肉芽组织形成、胶原沉积和血管新生。除此之外，GSP通过上调p-JNK/FOXO3a蛋白表达以实现下调ROS水平和促进抗氧化蛋白表达，进而调控线粒体自噬相关蛋白。JNK蛋白抑制剂实验进一步佐证GSP对p-JNK/FOXO3a蛋白表达水平的影响。体外实验中，4μg/ml浓度GSP对细胞无明显毒害作用，并能有效降低H2O2诱导下细胞氧化应激的损伤。经蛋白免疫印迹和超氧阴离子荧光检测探针进一步证明GSP通过激活p-JNK/FOXO3a蛋白表达有效降低DHE含量和上调抗氧化蛋白表达量，从而调控线粒体自噬水平。结论结合体内外实验结果表明，GSP通过p-JNK/FOXO3a/ROS信号通路调控内皮细胞线粒体自噬，从而促进小鼠创面愈合。
NETL