摘要
对于畜牧动物而言，去势具有促进生长、减少打斗及改善肉品质、降低动物发情期行为对生产的影响等作用。睾酮 (Testosterone, T)是主要的雄性激素，要由睾丸合成并分泌，去势可导致猪血清睾酮水平显著下降，前列腺细胞的生长和存活依赖于雄激素，雄激素在调控前列腺生长、结构维持及功能完整性发挥了重要的作用。睾酮浓度的增加会导致前列腺病理状况的产生，如增生、前列腺癌，睾酮剥夺或去势会导致前列腺尺寸减小、增生逆转以及上皮细胞的退化等。同时雄激素受体 (Androgen receptor, AR)在前列腺组织中高度表达，在前列腺发育过程中，前列腺细胞的生长和再生依赖于雄激素与AR 介导的信号通路，从而调控胚胎时期和出生后前列腺的继续生长, 并在随后的青春期与雄性激素共同作用激活前列腺的分泌活性。 前列腺作为雄性动物重要的副性腺，在雄性生殖功能的正常发育和维持中具有重要作用，然而目前对于公猪睾酮水平与前列腺发育相关的分子机制研究鲜有报道。本研究分离培养了猪的前列腺上皮细胞，并利用睾酮添加处理探究了睾酮对前列腺上皮细胞增殖的影响，并结合转录组测序筛选出了差异表达的 lncRNA G1374，进一步在体外明确了G1374可竞争性结合ssc-miR-124a，进而间接地对靶基因AR进行调控，最终影响前列腺上皮细胞增殖。本文主要得到以下结论： (1) 前列腺原代上皮细胞为单层贴壁生长，其形态呈扁平而不规则的多角形，并成片生长。睾酮处理后能显著促进前列腺上皮细胞的增殖能力，且在添加睾酮处理后 AR的表达被抑制。 (2) 转录组数据显示，差异表达的 lncRNA 可以作为 trans 调控原件，且预测的靶基因功能与前列腺生长发育调控相关。 (3) 睾酮处理可以抑制前列腺上皮细胞 lncRNA G1374 的表达，并促进 ssc-miR-124a的表达。 (4) 分别在前列腺上皮细胞中验证 lncRNA G1374 和 ssc-miR-124a 的功能后发现， lncRNA G1374 的功能与睾酮相似，会抑制前列腺上皮细胞增殖以及增殖相关基因的表达，与睾酮作用相反；而ssc-miR-124a过表达会促进前列腺上皮细胞增殖，与睾酮作用相同。 (5) 通过双荧光素酶报告系统证明，AR 是 ssc-miR-124a的靶基因，G1374 可以做为ssc-miR-124a的分子海绵调控前列腺上皮细胞的增殖。 综上所述，睾酮可以通过调控G1374-ssc-miR-124a-AR网络的途径调控猪前列腺上皮细胞，从而影响猪前列腺上皮细胞增殖。
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