摘要
研究背景： 血管平滑肌细胞（VSMC）是组成血管组织的主要细胞类型。在正常生理状态下，血管中成熟的血管平滑肌细胞主要呈现“收缩表型”，表现为高表达收缩蛋白，细胞收缩能力较强，胞内肌丝丰富，主要参与维持血管的收缩功能。当血管受到损伤或者局部环境改变时，收缩型血管平滑肌细胞可以向合成型表型转换，此时的血管平滑肌细胞以合成和增殖功能为主，收缩相关蛋白的合成减少，收缩功能减弱，胞内肌丝含量少，细胞外基质增多，利于血管壁的重塑。已有报道发现，血管平滑肌表型转换在主动脉夹层（Aortic Dissection，AD）、高血压、动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）等疾病中发挥重要作用。三联组氨酸核苷结合蛋白（HINT1）是一种高度保守的嘌呤核苷酸结合蛋白，以二聚体的形式普遍存在于哺乳动物的组织中，已有研究发现HINT1在肿瘤以及神经系统疾病中起着重要作用。但HINT1是否参与血管平滑肌细胞的表型转换过程，尚未有明确的报道。 目的： 利用血小板源性生长因子-BB（Platelet-Derived Growth Factor-BB，PDGF-BB）处理血管平滑肌细胞，诱导表型转换的细胞模型，研究HINT1在血管平滑肌细胞表型转换中的作用及分子机制。 实验方法和结果： 为了探究 HINT1 在血管平滑肌细胞表型转换中的作用，我们提取并培养 4周龄野生型（WT）和HINT1敲除（HINT1-/-）小鼠血管平滑肌细胞，给予PDGF-BB 处理，检测到 HINT1 的缺失，有效维持了血管平滑肌细胞的收缩表型，抑制了PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞表型转换。另外，我们提取并培养SD大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMCs），转染HINT1小RNA干扰序列（siHint1）下调细胞内HINT1的表达，并给以PDGF-BB处理，通过上述方法得到了一致结论。 接下来通过RNA-Seq技术进一步探究HINT1影响VSMCs表型转换的具体机制。通过生信分析发现：HINT1的缺失会明显下调血管平滑肌细胞中Integrin α6（ITGA6）的表达，从而抑制血管平滑肌表型转换。 为了探究HINT1是否通过ITGA6参与调控血管平滑肌细胞表型转换的，我们在下调HINT1的基础上过表达ITGA6，PDGF-BB处理，结果显示，ITGA6的过表达显著对抗了下调HINT1的抑制表型转换的作用。 结论： HINT1 的缺失下调血管平滑肌细胞内的 ITGA6 的表达，从而有效抑制了PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞表型转换。本课题揭示了血管平滑肌细胞表型转换的新机制，为表型转换参与的血管疾病的防治提供新思路。
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