摘要
禽流感(AI)是一种由正黏病毒科A型流感病毒引起的禽类疾病综合征，包括消化道、呼吸道、产蛋下降等疾病，在世界范围内广泛传播，严重危害养禽业的发展。H9N2亚型AIV是当前世界流行的主要亚型，于1994年传入我国，随后在全国蔓延开来，成为我国最主要的禽类疫病。目前疫苗免疫仍是防控H9N2亚型AIV的主要措施，由于疫苗的频繁使用H9N2亚型AIV在免疫压力下加速变异，导致近年来H9N2亚型AIV的流行愈演愈烈。 为了解当前H9N2亚型AIV变异情况，挑选合适的候选疫苗株，本研究对广东、广西、云南和贵州进行流行病学调查，共采集1749份样品，其中组织样品630份和拭子样品1119份，通过病毒分离鉴定，共分离阳性样品380份，总体阳性率为21.7%；其中阳性组织样品115份，阳性率为18.5%；阳性拭子样品265份，阳性率为23.7%。经鉴定共收获23株H9N2亚型AIV分离株，与同期分离的10株IBV存在共感染，共感染率为43.3%。 将23株H9N2亚型禽流感的HA、NA基因片段和5株疫苗候的6个基因片段（M、NS、NP、PA、PB1、PB2）进行扩增和测序，分析分离株的关键氨基酸位点的变化、遗传进化关系和氨基酸序列同源性。结果表明，HA基因：23株分离株都位于h9.4.2.5分支上，共细分为3个分支，都与经典参考株和疫苗参考毒株遗传距离较远；核苷酸同源性在91.6%~100%之间。 分析分离株内部基因变化，发现HA基因裂解位点均为PSRSSR↓G，符合低致病性禽流感的特征，HA基因234位氨基酸为L（Leu），可以与SAα2，6Gal受体特异性结合，使病毒具备感染哺乳动物的能力；HA基因共存在8个潜在的糖基化位点，在551aa~553aa位新增一个序列为NGS的糖基化位点。NA基因：23株分离株都属于Y280/like分支，细分为两个分支，与参考株A/duck/Hongkong Y439/97(H9N2)遗传距离较远；核苷酸同源性为89.6%~100%，差异较大；23株分离株在62aa~64aa位发生3个碱基缺失；共存在7~9个潜在的糖基化位点，在368位新增一个糖基化位点NGS，大部分分离株在86位缺失了糖基化位点NWS，所有毒株在431位的红细胞吸附位点上都由PQE突变为PHE。5株分离株M2蛋白基因上的第31位氨基酸均为I，能对金刚烷胺的产生一定程度的耐药性；PB2蛋白氨基酸序列发生第292位点I→V，588位点A→V的突变，在PB2蛋白关键位点的变化导致其感染哺乳动物的能力加强。5株候选疫苗株PA基因均发生L665M突变。候选疫苗株A/chicken/GX29/2021(H9N2)交叉免疫原性最好，制备灭活疫苗对鸡能产生100%的排毒保护和100%保护鸡不死亡。
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