摘要
胸腺是 T 细胞发育、分化和成熟的重要场所，在机体的免疫功能中发挥积极作用。白术多糖（Polysaccharide of Atractylodes Macrocephala Koidz，PAMK）是从中药白术中提取的绿色、天然的有效活性成分之一，具有抗癌、抗炎和提高机体免疫功能的作用。作为广东省优质肉鹅品种之一的马冈鹅，在育雏阶段容易遭受各种因素的影响，导致免疫功能降低，发病率和死亡率升高，对养鹅业造成经济损失，并且PAMK 对马冈鹅胸腺细胞的作用研究较少。因此，本文通过研究 PAMK 对马冈鹅胸腺细胞的影响，为开发 PAMK 作为新型、绿色的免疫保护剂和提高马冈鹅免疫功能提供参考。本实验以马冈鹅胸腺细胞为研究对象，采用细胞形态学观察、CCK-8 检测、流式细胞术、实时荧光定量等方法对 PAMK 处理后的细胞形态变化、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡以及细胞因子的表达水平等一系列指标进行分析，以此来探讨白术多糖对马冈鹅胸腺细胞的影响。研究结果如下： （1）细胞形态学观察结果和CCK-8法检测结果显示，单独使用PAMK，各组之间的细胞数量无明显变化，差异不显著。使用25 μg/mL PAMK和5 μg/mL ConA共同处理马冈鹅胸腺细胞48 h后，与5 μg/mL ConA组相比，细胞间隙明显减小，有显著的促增殖作用（P＜0.05）；与空白对照组相比，细胞形态规则，体积较大，分布更密集，促进细胞增殖的作用极其显著（P＜0.01）。 （2）细胞周期的结果显示，与空白对照组和ConA组相比，25 μg/mL PAMK和5 μg/mL ConA共处理组的G1期细胞数量极显著下降（P＜0.01），G2+S期细胞数量极显著升高（P＜0.01）。细胞凋亡的结果显示，各组之间的凋亡细胞数量相互比较，差异不够明显，无统计学意义。 （3）由qRT-PCR的结果可以看出，与空白对照组相比，共处理组的细胞周期相关基因CCND1的表达量显著升高（P＜0.05），CDK-6表达量极显著升高（P＜0.01）；细胞凋亡基因Bax和Bcl-2的表达量虽然有变化，但是组间差异不显著；细胞免疫因子TNF-α、IL-6、IL-10基因以及TLR4信号通路相关基因MyD88和IKKβ表达量均升高，TGF-β表达量和MAPK通路中的JNK表达量均下降。 结论：PAMK可以通过调控细胞周期的进程促进ConA诱导的马冈鹅原代胸腺细胞的增殖，其可能通过激活TLR4信号通路调节胸腺细胞的免疫作用。
NETL