摘要
虽然克隆技术已经被广泛应用于基础生命科学、生物医药、畜牧业等领域并发挥着重要的作用。但是，由于目前克隆效率十分低，严重限制了克隆技术的应用和后续发展。体外成熟的卵母细胞作为体细胞核移植的受体，其质量与克隆胚胎后续发育能力紧密相关。与体内成熟卵母细胞相比，屠宰场来源的体外成熟的卵母细胞质量较差，原因之一是体外成熟卵母细胞更容易遭受氧化应激。而环黄芪醇（CA）和黄芪甲苷Ⅳ（AS-Ⅳ）是两种黄芪提取物，具有强烈的抗氧化应激作用。 本研究在猪卵母细胞体外成熟培养液中分别或联合添加了两种黄芪提取物：环黄芪醇（Cycloastragalol，CA）、黄芪甲苷Ⅳ（Astragaloside IV，AS-Ⅳ），研究该两种黄芪提取物对猪卵母细胞体外成熟及后续胚胎（孤雌胚胎、克隆胚胎）发育能力的影响，并通过对卵母细胞进行活性氧检测、线粒体膜电位检测、脂滴检测、凋亡相关检测，解析黄芪提取物影响卵母细胞质量的相关机制。结果如下：（1）本研究在卵母细胞体外成熟（IVM）培养液中添加CA，结果表明15μg/mL的CA能显著提高孤雌胚胎的囊胚率（67.00 ± 2.24%vs. 50.79 ± 3.23%，P＜0.05），并且对胚胎卵裂率以及囊胚细胞数都有一定的促进作用。（2）在IVM培养液中添加15μg/mL的CA，对后续克隆胚胎发育没有作用。（3）在IVM培养液中添加15μg/mL的CA，能显著降低卵母细胞的ROS水平、显著提高线粒体膜电位水平和卵母细胞抗氧化应激基因表达（P＜0.05）。（4）IVM培养液中添加AS-Ⅳ，结果表明200μg/mL的AS-Ⅳ能显著提高孤雌胚胎的囊胚率（63.42 ± 2.68%vs. 42.94 ± 5.72%，P＜0.05），对胚胎卵裂率以及囊胚细胞数无作用。（5）IVM培养液中添加200μg/mL的AS-Ⅳ能显著提高后续克隆胚胎的囊胚率（16.67±1.93%vs. 10.52±1.00%，P＜0.05），对胚胎卵裂率和囊胚细胞数有一定的促进作用。（6）在IVM培养液中添加200μg/mL的AS-Ⅳ，能显著提高线粒体膜电位水平，显著降低卵母细胞的ROS水平以及卵丘细胞凋亡应激表达（P＜0.05）。（7）IVM培养液中添加15μg/mL的CA或者200μg/mL的AS-Ⅳ，都能显著提高卵母细胞脂滴含量，降低CASP3凋亡蛋白水平（Plt;0.05）。（8）15μg/mL CA与200μg/mL AS-Ⅳ联合处理对猪卵母细胞体外成熟率及后续孤雌胚胎发育能力没有作用。 综上所述，该研究结果证明在体外成熟培养液中补充黄芪提取物CA或者AS-Ⅳ能提高猪卵母细胞后续胚胎发育能力，其作用机制可能是通过提高抗氧化应激水平、线粒体活性、抗凋亡能力以及脂滴含量来实现的。该研究有助于探索建立用中药提取物处理提高体外成熟猪卵母细胞质量和后续克隆胚胎发育效率的新方法，促进猪繁殖技术的应用和发展。
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