摘要
H9N2亚型禽流感病毒近年来在我国持续广泛流行，日益成为禽类中分离率最高的禽流感病毒亚型，已经引起多例人类感染并对养禽业造成巨大的经济损失。虽然我国已经批准多个H9N2疫苗来防控它的传播流行，但因其在我国呈地方性流行的特点，个别地区适用的疫苗不能完全防控其它地区传入的H9N2亚型AIV。近些年来，H9N2的突变速率在加快，多个关键位点在发生突变，会导致病毒的生物学特性发生较大改变。因此有必要对H9N2亚型AIV进行进化特征、抗原性和致病性分子机制的研究。 本课题组于2018年开始持续监测广东省流行的H9N2 AIV，期间共采集20698份样品并分离到789株H9 AIVs。首先我们分析H9N2在广东省的流行情况和流行毒株的遗传进化情况，划分和确定当前流行的基因型，接着分析H9N2亚型AIVs的传播轨迹，比较广东省流行的H9N2亚型AIV的HA和NA的核苷酸替代率及其所受的正选择压力，最后分析流行毒株和疫苗株的抗原性差异。分析结果表明，分离株HA蛋白的163位点存在氨基酸多态性可能导致病毒的生物学特性不同，因此我们通过拯救当前流行毒株和163位点重组突变株，分析病毒的复制能力、传播能力、致病力和抗原性的差异来探究突变毒株的风险。 结果显示分离株的HA基因起源于BJ/94-like谱系，分别属于Clade 15的两个次级分支，说明Clade 15分支持续在全国范围内流行多年后，H9N2 AIV再次出现分歧，分化出多个次级分支。本研究鉴定了G126和G127两个新基因型，发现G57基因型仍占据绝对优势。2010~2022年间，华中和华东地区为H9N2流行中心，与其它地区联系紧密。分析广东省的毒株，发现HA基因进化速率高于全国的平均速率，受到的正选择压力低于全国水平，NA基因进化速率低于全国平均速率。个别代表株之间抗原性差异显著，与商品化疫苗中和反应差，说明近年流行于广东省的H9N2亚型AIV进化成多个抗原群，且现有疫苗不能完全预防流行毒株。 HA蛋白的163位点突变会影响病毒的受体结合能力，通过反向遗传学实验我们构建了当前流行毒株的完整骨架并做了点突变处理，发现此位点突变为C的病毒不能成功拯救，其余突变毒株在鸡胚、MDCK细胞和DF1细胞上都能复制。鸡攻毒实验表明，突变毒株对鸡的致病力低于亲本毒株，但163I和163S突变导致病毒能在鸡的脾脏中复制，163N突变导致鸡脾脏中炎性因子表达水平升高，163I导致鸡肺脏中炎性因子表达水平升高，163M突变导致毒株抗原性变化明显。小鼠攻毒实验表明，163Iamp;nbsp;突变显著增强病毒在小鼠肺脏的复制能力，但163N突变导致复制能力下降，163M和163N与163I突变株的抗原性差异明显。
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