摘要
莲须Nelumbinisstamen为睡莲科莲属植物莲NelumbonuciferaGaertn.的干燥雄蕊。《中国药典》（2020版，一部）并没有收录莲须的含量测定项，而现有的莲须含量测定方法并未与活性、功效相关联。莲须的固肾涩精功效主要治疗遗精和尿频等症状，这些症状常因为炎症反应引起的前列腺炎以及感染性蛋白尿等引起。而实验证明了莲须对由炎症反应，感染，以及血栓引起的肾小球膜的通透性增高、肾小管重吸收功能破坏而产生的蛋白尿，具有良好的疗效。以及莲须中的紫云英苷可以通过提高抗氧化活性和抑制炎症反应对链脲佐菌素诱导的雄性小鼠糖尿病精子产生保护作用。这些证明了莲须主治症中的遗精，尿频等症状可能与炎症反应有关，因此研究其抗炎活性对其成分功效联系有必要性。为了从莲须中发现更多具有抗炎活性的化学成分，对莲须的化学成分进行研究，采用由LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型，结合原位电离质谱法，寻找到进入细胞成分与细胞膜结合的成分，评价其抗炎活性，将具有活性的化合物作为质控标志物，建立莲须的含量测定法，以期能合理评价莲须的品质。 目的: 寻找与莲须功效相关的化学成分作为质控标志物，并建立莲须的含量测定方法。 方法: 1.使用由LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型，对莲须的总提取物和不同萃取部位进行活性筛选，确定抗炎活性部位。 2.通过硅胶柱层析、ODS、MCI等手段，对莲须的抗炎活性部位进行分离和纯化，再结合质谱和波谱等方法鉴定化合物的结构。 3.采用原位电离质谱法EFISI-MS,检测活性部位进入细胞或与细胞膜结合的化学成分，使用已分离得到的化学成分和对照品对其进行结构验证，最后对这些潜在的指标成分进行活性检测。 4.使用超高效液相色谱法对莲须中的指标成分进行含量测定。 结果: 1.莲须甲醇提取物、乙酸乙酯萃取部位和水部位的抗炎活性显著，而且呈现剂量依赖性，对比之后，发现其乙酸乙酯部位有更显著的活性，因此我们选择莲须的乙酸乙酯部位继续进行研究。 2.从莲须提取物乙酸乙酯萃取部分中分离得到50个化合物，包括萜类化合物17个（1～17），木脂素类化合物8个（18～25）,黄酮类化合物11个（26～38），甾体类化合物4个（39～42）,其他类化合物8个（43～50）。其中化合物1为新化合物，化合物8、12、42和43为新天然产物，化合物6～7、9、13～25、31、33、38～40、46、49为首次在莲属中分离得到，化合物10、31～33、37、44～45、47、50为首次在莲须中分离得到。 3.使用原位电离质谱法EFISI-MS检测到乙酸乙酯部位进入RAW264.7细胞或细胞膜的化学成分有β谷甾醇、三叶豆苷、紫云英苷、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷、异槲皮苷、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-α-L-来苏糖-（1→2）-β-D-葡萄糖苷和齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄糖苷8个。其中三叶豆苷、紫云英苷、异槲皮苷、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-α-L-来苏糖-（1→2）-β-D-葡萄糖苷这五个成分具有显著的抗炎活性，能够抑制RAW264.7细胞释放NO,是潜在的指标成分。 4.建立基于5个指标成分的一测多评含量测定方法，其精密度、重复性、稳定性和准确度结果均显示良好。 结论: 采用由LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型，确定抗炎活性部位，并从中分离得到50个化合物，包括1个新化合物，4个新天然产物，23个首次从莲属中分离得到的化合物和9个首次从莲须中分离得到的化合物。然后结合原位电离质谱法，对检测到莲须活性部位进入的RAW264.7细胞或细胞膜的化学成分有8个，其中活性明显的5个成分为指标成分，建立莲须的一测多评含量测定方法。测定27批莲须样品的含量，为莲须的质量标准提升提供理论依据。
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