摘要
目的: 对于缺血脑内小胶质细胞极化过程的调控一直被认为是减轻脑缺血后神经炎症反应的重要途径。当缺血性脑卒中发生后，小胶质细胞迅速激活并向缺血脑组织聚集，产生M1型与M2型两种不同的功能表型极化，进而影响缺血脑内神经炎症反应。最新研究表明，瞬时受体电位香草酸4通道(Transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)作为一种非选择性阳离子通道，在中枢神经免疫炎症反应中发挥至关重要作用。在此基础上，我们结合《黄帝内经》“督脉入脑”理论探究电针水沟百会穴干预TRPV4调节小胶质细胞极化减轻脑缺血神经炎症反应机制，为针刺临床从督论治缺血性脑卒中提供实验研究依据。 方法: 1.理论研究:通过查阅文献，明晰中风病的发病机制，阐明《黄帝内经》“督脉入脑”的理论内涵，并根据古今文献筛选出督脉水沟穴和百会穴作为针刺研究穴位。 2.实验研究:2.1电针水沟百会穴对大脑中动脉闭塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)小鼠的治疗效果:通过转棒实验、神经功能缺失评分、胶带去除实验评估电针水沟百会穴对MCAO小鼠的行为学改变情况;TTC染色评估小鼠脑梗死体积。2.2电针水沟百会穴对缺血脑皮层小胶质细胞极化的影响:使用免疫荧光染色以及Sholl分析检测脑缺血半球皮层小胶质细胞激活情况;通过免疫荧光染色、qPCR、Western Blot对M1及M2型小胶质细胞的极化情况及分泌细胞因子进行检测。2.3电针水沟百会穴干预TRPV4调节小胶质细胞极化减轻脑缺血神经炎症反应:Western Blot检测TRPV4蛋白表达水平;使用免疫荧光对小鼠脑组织及BV2细胞系进行实验，验证TRPV4在小胶质细胞上的表达情况;BV2细胞系上给予TRPV4拮抗剂，并检测M1型小胶质细胞相关的促炎因子Il-1β、Tnf-α、Il-6的mRNA表达水平;同时在体腹腔注射TRPV4拮抗剂，探究小鼠行为学的改变情况，以及对小胶质细胞的激活和相关促炎因子的表达情况。 结果: 1.电针水沟百会穴对MCAO小鼠神经功能损伤有着显著改善作用，并减小脑梗死体积。 2.电针水沟百会穴抑制MCAO小鼠缺血大脑皮层小胶质细胞的活化，减少其向M1型极化，下调相关促炎因子Il-6、Ccl-2、Il-1β、Tnfα的mRNA表达水平;但对于M2型小胶质细胞极化及相关抑炎因子则没有影响。 3.电针水沟百会穴可以抑制脑缺血再灌注后TRPV4的过度上调;拮抗TRPV4后，小鼠行为学表现、小胶质细胞激活及相关促炎因子表达水平与电针治疗均无统计学差异，同时使用电针治疗及拮抗剂治疗并未出现协同或叠加效应。 结论: 1.基于《黄帝内经》“督脉入脑”理论，从督论治中风病具有深厚的中医理论基础及临床实践意义。 2.电针水沟百会穴对MCAO小鼠神经功能损伤以及脑梗死体积均有改善作用。 3.电针水沟百会穴可以抑制MCAO小鼠缺血脑皮层小胶质细胞的激活，抑制小胶质细胞向M1型极化。 4.电针水沟百会可能是通过抑制TRPV4过度表达，减少小胶质细胞激活和M1型极化来改善脑缺血神经炎症反应。
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