摘要
背景 心力衰竭(heartfailure,HF)是由于心脏泵血功能受损，心排血量无法满足全身组织基本代谢而形成的综合征。HF患者会出现体液潴留、活动受限，甚至呼吸困难等症状，严重影响其生活质量，且HF的发病率随年龄的增长而增加，预后差，对患者寿命有较大的威胁。《2021 ESC急慢性心力衰竭诊断和治疗指南》将射血分数＜40％的心衰称为射血分数降低的心衰(Heart failure with reduced ejection fraction,HFrEF)，其死亡率高，临床治疗效果不理想，对其治疗方案有待进一步探讨。中医中药在治疗心衰方面有着丰富的经验，具有多途径、多靶点及安全有效的特点，能够减轻患者痛苦，改善患者症状。黄芪保心汤应用多年，在治疗心衰方面有着满意的疗效，前期研究表明，黄芪保心汤可改善扩张型心肌病及心梗后心衰患者的心功能，并部分阐释了其作用机制，但黄芪保心汤对HFrEF的研究相对较少。 研究一基于网络药理学方法研究黄芪保心汤治疗HF的作用靶点及作用机制 目的 基于网络药理学方法研究黄芪保心汤治疗HF的作用靶点及作用机制 方法 检索TCMSP数据库(OB＞30％及DL≥0.18)及BATMAN-TCM数据库(score cutoff≥20且P-value cutoff＜0.05),得到黄芪保心汤的化学活性成分，同时搜索文献进行补充。利用UniProt数据库找到对应的基因，即可形成黄芪保心汤活性成分作用的药物靶点。查询 TTD、DisGeNET、Drugbank、GeneCards 及 OMIM 数据库中关于"heart failure"的相关疾病靶点，综合后去除重复部分，得到HF的疾病靶点。将黄芪保心汤药物成分靶点与HF靶点取交集，可作为黄芪保心汤治疗HF的潜在靶点。利用Cytoscape3.8.2软件绘制“中药-活性成分-疾病靶点”多维调控网络。使用clusterProfiler对交集靶点进行了基于GO及KEGG的富集分析。再利用STRING数据库构建交集靶点的蛋白质互作网络，使用节点的连接度(DegreeTOP5)识别网络中核心基因。应用Autodock4.2软件对黄芪保心汤中的4个核心靶蛋白(AKT1、IL-6、TNF-α和MMP9)与其靶向OB值最高的一种活性成分做分子对接，导入PyMol软件进行可视化处理。 结果 综合所有药物的活性成分后，黄芪保心汤中含有188种活性成分，509个药物靶点，HF有3190个疾病靶点，二者取交集，共获得275个交集靶点和177个药物活性成分。对275个交集靶点进行了基于GO及KEGG的富集分析，主要富集到了:肽反应、伤口愈合、缺氧反应等GO术语;PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、AGE-RAGE信号通路等KEGG通路。核心靶点前20位分别为:AKT1、IL-6、TNF-α、VEGFA、TP53、IL-1β、EGFR、SRC、JNK、ESR1、CASP3、STAT3、FN1、HIF-1α、C-MYC、EGF、MMP9、PTGS2、PPARG、PTEN。对黄芪保心汤中的4个核心靶蛋白（AKT1、IL6、TNF和MMP9）与其靶向OB值最高的一种活性成分做分子对接后发现，黄芪保心汤能稳定地对接到核心靶点蛋白结构的活性口袋中，结合能均小于0,显示了两者之间具有良好的结合能力。 结论 黄芪保心汤对HF的治疗是多靶点、多途径的，其核心作用靶点主要有AKT1、IL-6、TNF-α、VEGFA、MMP9 等，KEGG 主要富集到了:PI3K/Akt 信号通路、MAPK信号通路、AGE-RAGE信号通路等KEGG通路，其中以PI3K/Akt信号通路最为显著。分子对接结果显示，黄芪保心汤关键有效成分和HF核心靶点结合能均小于0,表明两者之间可以稳定的结合。由此推断PI3K/Akt信号通路是黄芪保心汤治疗HF的主要作用途径之一。 研究二黄芪保心汤对气阴两虚血瘀型HFrEF患者的临床疗效观察 目的 观察黄芪保心汤对气阴两虚血瘀型HFrEF患者的临床疗效,为中医药治疗HFrEF提供理论支持。 方法 选取2021年12月-2022年12月期间在徐州市中医院心血管科住院治疗的气阴两虚血瘀型HFrEF患者64例。利用随机数表法生成随机数字，将符合标准的患者随机分为对照组（32例）及治疗组（32例）。对照组采用标准西医治疗方案，包括BB、MRA、ARNI及SGLT2i。治疗组在对照组基础上加用黄芪保心汤口服，在治疗前及治疗30天结束后分别检测患者的肝功能、肾功能、hs-CRP、NT-proBNP及IL-6指标，测量LVEF，进行中医证候积分、MLHFQ、纽约心功能评定、6MWT,观察比较疗效。 结果 1.两组治疗后中医证候积分、MLHFQ评分均较前降低（P＜0.001），且上述指标在治疗前后差值方面，治疗组优于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）;在中医证候疗效评价方面，治疗组患者总有效率为86.67％。对照组患者总有效率为75.86％,差异无统计学意义（P＞0.05）; 2.两组NYHA心功能分级:治疗组总有效率为93.33％,对照组为89.66％,治疗组显效、有效、无效分别为4例、24例、2例，对照组分别为3例、23例、3例，经卡方检验，两组差异无统计学意义（P＞0.05）; 3.两组治疗后6MWT步行距离均较前增加（P＜0.001），两组治疗后6MWT差异无统计学意义（P＞0.05），但两组治疗前后6MWT差值比较，差异有统计学意义（P＜0.05); 4.两组治疗后LVEF水平均较前增加（P＜0.001），但上述指标在治疗前后差值方面，无统计学差异（P＞0.05）; 5.两组治疗后血浆NT-proBNP水平较前均降低（P＜0.001）,但在治疗前后差值方面，两组差异无统计学意义（P＞0.05）; 6.两组治疗后hs-CRP水平、IL-6水平均较前降低（P＜0.05），但在hs-CRP治疗前后差值方面，两组差异无统计学意义（P＞0.05）,在IL-6治疗前后差值方面，两组差异有统计学意义（P＜0.05）; 7.安全性评价:治疗前后两组患者AST、ALT、Cr及BUN水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论 HFrEF患者治疗前NT-proBNP、hs-CRP及IL-6指标较正常水平升高，黄芪保心汤联合标准西医治疗方案，可改善气阴两虚血瘀型HFrEF患者的症状及心功能，降低hs-CRP、NT-proBNP及IL-6,可能部分通过抑制炎症反应实现。 研究三 黄芪保心汤改善心衰大鼠心功能的机制研究 目的 观察黄芪保心汤改善冠脉结扎心衰大鼠炎症反应、心肌形态、心肌细胞凋亡的作用，进一步研究该作用和PI3K/Akt信号通路是否存在关联，分析黄芪保心汤改善冠脉结扎心衰大鼠炎症反应、心肌细胞形态、心肌细胞凋亡的作用机理。 方法 应用随机数字表法从70只SD大鼠中选取8只为假手术组（仅在前降支穿线不结扎），其余62只大鼠行冠脉结扎法（结扎前降支，4周）建立心衰模型，彩超验证后共成模40只，随机分组给药如下:模型组（等量生理盐水）、黄芪保心汤高、中、低剂量组（分别为23.22g、11.61g、5.805g生药/kg）和卡托普利组（6.75mg/kg），每组8只，另有假手术组大鼠8只（等量生理盐水），连续4周每天灌胃给药1次，末次给药后，超声心动图检测大鼠心脏结构及功能改变;ELISA法测定大鼠血清及组织中IL-6、MMP-9的水平;HE染色观察大鼠心肌组织形态学改变;TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡程度;Western blot检测各组心衰大鼠心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3及PI3K/AKT通路蛋白表达。 结果 1.与假手术组比较，模型组大鼠LVEDD、LVESD升高(P＜0.05），EF和FS数值均降低（P＜0.05）;大鼠血清及心肌组织中IL-6、MMP-9含量明显升高（P＜0.05）;HE染色显示心肌细胞出现肥大、坏死及纤维化，心肌纤维排列紊乱，间质水肿，炎症细胞浸润;TUNEL染色显示心肌细胞凋亡率升高（P＜0.05）;Western blot检测显示心肌组织 Bax、Caspase-3 表达升高（P＜0.05），Bcl-2 下降（P＜0.05），p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT降低（P＜0.05）。 2.与模型组比较，黄芪保心汤高、中、低剂量组及卡托普利组大鼠LVESD均降低（P＜0.05），EF和FS数值均升高（P＜0.05）,黄芪保心汤中剂量组LVEDD降低（P＜0.05）;大鼠血清及心肌组织中IL-6、MMP-9的水平降低（P＜0.05）;HE染色显示黄芪保心汤低、中、高剂量组心肌细胞肥大、坏死、纤维化情况及间质水肿、炎症细胞浸润情况随着剂量的增加而减轻，心肌纤维排列也逐渐趋于有序;TUNEL染色显示黄芪保心汤低、中、高剂量组及卡托普利组大鼠心肌细胞凋亡率降低（P＜0.05）;Western blot检测显示黄芪保心汤中、高剂量组及卡托普利组心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达下降（P＜0.05），Bcl-2 升高（P＜0.05）,中、高剂量组及卡托普利组 p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT升高（P＜0.05）。 结论 黄芪保心汤可减轻冠脉结扎心衰大鼠炎症反应、降低心肌细胞纤维化水平，抑制心肌重塑，通过PI3K/Akt信号通路下调Bax、Caspase-3蛋白表达，上调Bcl-2蛋白表达，发挥抑制心肌细胞凋亡，改善心功能的效果。
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